结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)

　　(Violet Red Bile Glucose Agar)

　　用 途：

　　结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂用于阪崎肠杆菌的选择性分离培养以及肠道菌的计数和鉴别(SN/T 1632.1-2005)。

　　原 理：

　　蛋白胨和酵母抽取物提供碳氮源和微量元素;乳糖和葡萄糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;3号胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂。

　　培养基配方(每升)：

　　酵母抽取物 　3g

　　蛋白胨 　7g

　　氯化钠 　5g

　　3号胆盐 1.5g

　　乳糖 　 10g

　　葡萄糖　　10g

　　中性红 　0.03g

　　结晶紫 　0.002g

　　琼脂 　15g

　　最终pH 7.4±0.2

　　使用方法：

　　1、称取结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂51.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，备用(不得超过3h)。

　　2、取奶粉样品333克按MPN三管法分别取100克、10克和1克分装在各三个2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已装有经45℃预热的9/10(样品为1/10)的无菌蒸馏水，摇匀，在36±1℃培养18-22小时(SN和FDA方法)。

　　3、各取10ml上述悬浮液加到装有90mlEE肉汤(022160)的150ml的三角瓶中，在36±1℃增菌培养18-22小时。

　　4、用划线或涂布法把混匀的EE肉汤接种到VRBGA琼脂平板上，36±1℃培养18-22小时。

　　5、从VRBGA平板上挑取5个可疑菌落分别接种到5个TSA平板，25±1℃培养48-72小时。

　　6、可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管试验，对疑似阪崎肠杆菌菌落进行生化鉴定。

　　7、奶粉以外的其它样品，以无菌手续取样品25g或25mL，加入含225mL无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的三角瓶内，充分振摇或用均质器均质1min成1：10稀释液，然后以1：10继续稀释，选择三个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个平皿，倾注加热溶解并冷至45℃左右的培养基。

　　8、观察结果。

　　质量控制：

　　本品倾注平皿后呈暗紫红色，下列菌株接种后于36±1℃培养18—24h生长情况如下表。

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：250g

　　参考文献:

　　1.SN/T 1632.1-2005 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第一部分:分离与计数标准