028380 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)

　　(Mannitol Yolk Polymyxin Agar Base)

　　用 途：

　　用于蜡样芽孢杆菌的菌数测定及分离培养(GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92和SN/T2206.2-2009，ISO标准)。

　　原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子;D—甘露醇为可发酵糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂;卵黄含有卵磷脂，蜡样芽孢杆菌产生卵磷脂酶，在菌落周围产生沉淀环;并发酵D—甘露醇产酸使菌落显黄色;多粘菌素B可抑制杂菌的生长。

　　配方(每升)：

　　蛋白胨 10g

　　牛肉膏粉 1g

　　D—甘露醇 10g

　　氯化钠 10g

　　琼脂 15g

　　酚红 0.025g

　　最终pH7.4±0.2

　　使用方法： (平板计数法)

　　1、称取本品46g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，每瓶100mL，121℃灭菌15分钟。

　　2、用时加热溶化琼脂，冷至50℃后，每100mL培养基基础中加入配套试剂1支 (SR0170)( 多粘菌素B10000IU) 和50%卵黄液5mL，混匀后倾注灭菌培养皿。

　　3、样品的制备。

　　以无菌操作将检样25g(mL)用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1—10-5的稀释液。

　　4、取各稀释液0.1mL接种到MYP琼脂平板上，用灭菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面。每稀释度接种两个MYP琼脂平板。

　　5、将平板置于36±1℃培养12—20h。

　　6、选取适当菌落的平板进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。

　　蜡样芽孢杆菌在MYP平板上生成的菌落为粉红色，环绕产生卵磷脂酶沉淀环。如反应不典型，可继续培养24h再计数。

　　7、计数后从每个平板上选取5个已计数的菌落，按有关操作进行证实实验。

　　8、根据证实实验确定为蜡样芽孢杆菌的菌落数，按比例计算出该皿内的蜡样芽孢杆菌菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克(或mL)样品所含蜡样芽孢杆菌数。例如MYP平板的可疑菌落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数(如10-4)，再乘上1 g(或mL)检样数(取的是0.1mL样)则为：

　　25×4/5×10-4×10=2×106

　　附：50%卵黄液: 取鲜鸡蛋，用硬刷将蛋壳彻底洗净，沥干，放于70%酒精溶液中浸泡1h，以无菌操作取出卵黄，加入等量灭菌生理盐水，混匀后备用。

　　质量控制：

　　质控菌株接种后于36±1℃培养24h，结果如下。

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：250g

　　参考文献:

　　1. GB/T 4789.14-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 蜡样芽孢杆菌

　　2. GB/T 4789.28-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 染色法,培养基和试剂

　　3. SN 0176-92 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法

　　4. SN/T2206.2-2009 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 化妆品微生物检验方法 第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌

　　5.ISO7932：2004 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus-Colony- technique at 30℃