028020 胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础(TSC)

　　(Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base) (Iron Sulfite Agar)

　　用 途：

　　用于食品和临床样本中产气荚膜梭菌的分离培养和计数(SN0177-92，ISO标准)。

　　原 理：

　　胰月示 、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;偏亚硫酸氢钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色;卵黄含有卵磷脂，可检测某些含卵磷脂酶的梭菌;琼脂是培养基的凝固剂;D-环丝氨酸抑制非梭菌的细菌。

　　配方(每升)：

　　胰月 示 15g

　　大豆胨 5g

　　酵母膏粉 5g

　　偏亚硫酸氢钠 1g

　　柠檬酸铁铵 1g

　　琼脂 15g

　　最终pH 7.6±0.2

　　使用方法：

　　1.称取本品42g，加入蒸馏水或去离子水1000 mL ，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，每 瓶250 mL ，121℃高压灭菌15 mL。

　　2.待TSC培养基冷至50℃左右，每100 mL培养基基础加入配套试剂1支(SR0290)(D-环丝氨酸0.5mg)，(制作卵黄平板：加50%卵黄乳液10 mL到100 mL培养基中)，立即摇匀。

　　3.倾注TSC琼脂到10个灭菌平皿中，每皿约5 mL，并迅速旋转平皿，使琼脂铺平。当琼脂凝固后，将每个平皿编号标记，以无菌操作，吸取稀释样品1 mL分别加到每个琼脂平板表面中心。再向平皿中倾注TSC琼脂15 mL，缓慢地旋转平皿，使其与接种物混合均匀。(也可用L型玻璃棒，将0.1 mL样品稀释液均匀地涂布于含卵黄乳液的TSC琼脂上，将平板水平静置5—10 min使接种物被吸收。然后用不含卵黄的TSC琼脂10mL覆盖平板表层(含卵黄的TSC琼脂最适于同时含有其他还原亚硫酸盐梭状芽孢杆菌的食品)。

　　4.琼脂凝固后，将平板正置于厌氧罐内，于36±1℃培养。不含卵黄的TSC琼脂平板培养20h，含卵黄的TSC琼脂平板培养24h。

　　5.取出平板用肉眼观察生长情况和观察有无黑色菌落。挑选生长有20—200个黑色菌落的平板，用菌落计数器将黑色菌落计数并半算每克食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌数。产气荚膜梭菌的菌落在含 卵黄的培养基上呈黑色。并通常有2—4mm宽的白色沉淀环(卵磷脂酶作用的结果)。但有少数菌株的卵磷脂酶反应较弱，或呈阴性。应对所有怀疑为产气荚膜梭菌的黑色菌落进行计数，并做进一步的证实试验。

　　附：卵黄乳液：

　　用硬刷刷洗鲜蛋，沥干，放70%乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄，加等体积无菌0.85%氯化钠溶液，混合置4℃贮存。

　　质量控制：

　　下列菌株接种于含卵黄的TSC琼脂平板于36±1℃培养24 h结果如下：

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：100g

　　参考文献：

　　1.SN 0177-1992 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中产气荚膜梭菌检验方法

　　2.ISO 7937：2004 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens-Colony- technique

　　3.SO 15213：2003 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions