027310　改良番茄汁琼脂培养基基础

　　(Modified Tomato Juice Agar Base)

　　用 途：

　　改良番茄汁琼脂培养基基础用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T16347-1996，GB/T4789.35-2003和SN/T1941.1-2007)。

　　原 理：

　　番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质;牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌;琼脂是培养基的凝固剂。

　　改良番茄汁琼脂培养基基础配方(每升)：

　　酵母膏粉 5g

　　牛肉膏粉 10g

　　乳糖 20g

　　葡萄糖 2g

　　磷酸氢二钾 2g

　　吐温-80 1g

　　乙酸钠 5g

　　琼脂 15g

　　最终pH 6.8±0.2

　　使用方法：

　　1、切碎洗净的新鲜番茄，放入三角瓶，置4℃冰箱8—12h，取出后用纱布过滤。称取本品60g，加入950 ml蒸馏水或去离子水和50ml番茄汁，搅拌加热煮沸至完全溶解，校正pH后分装三角瓶，121℃高压灭菌15min。

　　2、无菌操作将经过充分摇匀的检样25g(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内，振摇均匀，即为1：10稀释液，依次做1：100、1：1000……稀释。

　　3、选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

　　4、将培养基凉至50℃左右，将培养基注入平皿中约15mL，待琼脂凝固后，翻转平板，置于36±1℃温箱中培养72±3h。

　　5、选择菌落数在30—300个之间的平皿进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽孢的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌落计算出该皿内的乳酸数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10-4的稀释液在改良TJA培养基平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1 mL检样中乳酸菌数为：35× 4/5×104=2.8×105

　　质量控制：

　　下列菌株接种后于36±1℃培养72h结果如下：

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：250g

　　参考文献：

　　1.GB/T4789.35-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验标准 乳酸菌检验

　　2.GB/T16347-1996 中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验

　　3.SN/T1941.1-2007中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分 分离与计数方法。