022240 克氏双糖铁琼脂

　　(Kligler Iron Agar)

　　用 途：

　　克氏双糖铁琼脂用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖，及产生硫化氢的生化反应(GB/T4789.28-2003 中4.29，GB/T4789.6-2003)。

　　原 理：

　　蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素、矿物质;乳糖、葡萄糖为可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出，酸性呈黄色，碱性呈红色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，与铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。各种革兰氏阳性杆菌也可生长及产生硫化氢。

　　培养基配方(每升)：

　　蛋白胨 20g

　　牛肉膏粉 3g

　　酵母膏粉 3g

　　乳糖 10g

　　葡萄糖 1g

　　氯化钠 5g

　　柠檬酸铁铵 0.5g

　　硫代硫酸钠 0.5g

　　琼脂 12g

　　酚红 0.025g

　　最终pH 7.4±0.2

　　使用方法：

　　1、称取克氏双糖铁琼脂55g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管(装量宜多些)，121℃高压灭菌15min，制成高层斜面，待冷却后，备用。

　　2、挑取待检菌的新鲜培养物，穿刺接种混合克氏双糖铁琼脂斜面。接种时先在斜面划线，然后再穿刺底层，反之亦可。(应注意不要在分离平板上菌落密集的部位挑取可疑菌落，而应在菌落稀疏部位挑取单个菌落。)

　　3、将试管放入培养箱内36±1℃培养18—24h。

　　4、观察结果。观察斜面与底层的反应情况。

　　质量控制：

　　配成的培养基为红色，下列菌株接种后于36±1℃培养24h结果如下：

　　注：“A”为产酸，“K”为产碱。

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格：250g

　　参考文献：

　　1.GB/T4789.6-2003 中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验 致泻大肠埃希氏菌检验

　　2.GB/T4789.28-2003中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 染色法，培养基和试剂