营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)

　　(Nutrient Agar)

　　用 途：

　　营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。

　　原 理：

　　蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

　　配方(每升)：

　　蛋白胨10g

　　牛肉膏粉3g

　　氯化钠 5g

　　琼脂15g

　　最终pH 7.3±0.2

　　使用方法：

　　1、 称取营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

　　2、 (食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。

　　3、 根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

　　4、 稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

　　5、 观察结果。

　　6、 菌落计数方法：

　　做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

　　7、 菌落计数的报告：

　　选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计

　　A：稀释度的选择：

　　应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。

　　若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30—300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。

　　若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。

　　若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。

　　若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。

　　若有稀释度的平均菌菌落数均不在30—300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。

　　菌落数的报告：

　　菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。

　　稀释度选择及菌落数报告方式

　　质量控制：

　　本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：

　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

　　规 格： 250g

　　参考文献:

　　1. GB15979-2002 中华人民共和国国家标准 一次性使用卫生用品卫生标准

　　2. GB/T 4789 .2—2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验标准 菌落总数测定

　　3. GB15981-1995 中华人民共和国国家标准 消毒与灭菌效果的评价方法与标准

　　4. ISO 21528-1;2004 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal methods for the detection enumeration of Enterobacteriaceae-Part1 Detection enumeration by MPN technique with pre-enrichment

　　5. ISO 21528-1;2004 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal methods for the detection enumeration of Enterobacteriaceae-Part 2 Colony- method

　　6.ISO 6579：2002 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal method for the detection of Salmonella spp.

　　7.ISO 10273-2003 Microbiology of food animal feeding stuffs-Horizontal method for the detection of presumptive pathogenic Yersinia enterocolitica

 

　　8.ISO6785-2001 Milk milk products-Detection of Salmonella spp