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特性
连接单链 RNA 和 DNA
用 5´ -[32P] pCp 进行 RNA 3´ 末端标记
RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接
合成单链寡脱氧核苷酸
蛋白质中掺入非天然氨基酸
概述
催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。
来源
携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。
反应条件
1X T4 RNA 连接酶缓冲液
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,1 mM DTT],加入 1 mM ATP,37℃ 温育。
热失活:65℃ 15 分钟或煮沸 2 分钟。
使用注意事项
pCp 的连接需要加入终浓度为10%(v/v)的 DMSO。
随酶提供试剂
10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP(NEB #M0204)或 100 mM ATP(NEB #M0437)50% PEG 8000
质保声明
无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。
单位定义
1 单位指 37℃ 条件下,30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
浓度
10,000 或 30,000 units/ml。
参考文献
有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。