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T4 RNA 连接酶 2，截短型 K227Q
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miRNA 通用克隆接头
#S1315S 5 μg ¥2,109
特性
将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 末端
将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 文库构建
将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异性 cDNA 文库构建
概述
T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到 RNA 的 3´ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。
T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB #M0242）的双点突变体。K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性，K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
连接反应的背景被降为最低是因为：不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶已用于二代测序 small RNA 的文库构建中，优化了接头的连接过程。
来源
重组 E. coli 菌株，携带有 MBP 融合表达的质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前 249 个氨基酸编码。T4 Rnl2tr K227Q 将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和 227 位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。
反应条件
1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。
随酶提供的试剂
10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000
质保声明
无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
单位定义
200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB #S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。
浓度
参考文献
有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。
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