T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链 DNA 或 RNA)的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶(NEB #M0201)还具有 3´ 磷酸酶活性,将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶(NEB #M0236)具有所有激酶的活性,但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。
重组 E. coli 菌株,克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。
达到最佳酶活力,需要新鲜缓冲液(在旧缓冲液中,由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力)。
一般来说,进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下,T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接,无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态,则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。
在 50 μl T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液体系中,37℃温育 30 分钟,γ-磷酸基团从 ATP 转移至 d(T)8 的 5´ 羟基末端 [ATP 与 d(T)8 比例是 1:1,量为 50 pmol],结果显示 20 单位酶量可使超过 90% 的磷酸基团转移。
T4 多聚核苷酸激酶和 T4 多聚核苷酸激酶(3´ 磷酸酶活性缺失)经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
1 单位即 1 个 Richardson 单位,指 37℃条件下,30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量(1)。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
10,000 units/ml。
关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
温馨提示:因厂家更改产品包装、产地或者更换随机附件等没有任何提前通知,且每位咨询者购买情况、提问时间等不同,为此以下回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!若由此给您带来不便请多多谅解,谢谢!
服务热线
0771-3293894