特性
去除 DNA 或 RNA 3´ 突出末端生成平末端
概述
核酸外切酶 T(Exo T),又称为 RNase T,是一种单链 RNA 或 DNA 特异性核酸酶,该酶需要游离的单链 3´ 末端,以 3´ →5´ 方向去除核苷酸。核酸外切酶 T 对于 DNA 的活性比 RNA 高 10 倍。核酸外切酶 T 可用于含有 3´ 突出末端的 RNA 或 DNA 的末端平滑化。
来源
核酸外切酶 T 与麦芽糖结合蛋白(MBP)进行 C-端融合后过表达并纯化。再通过 Xa 因子剪切去除 MBP,然后纯化去除因子 Xa 和 MBP。从 MBP 上切割的核酸外切酶 T 在 N 端多出一个氨基酸,且 Phe 替换了 Met(即 Glu-Phe-Exo T 而非 Met- Exo T)。
反应条件
1X NEBuffer 4
[50 mM KAc,20 mM Tris-Ac,10 mM Mg (Ac)2,1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ],25℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。
质保声明
单位定义
1 单位指 100 μl 反应体系中,25℃ 条件下,30 分钟从 1 nmol [3H]-标记的多聚胸腺嘧啶生成 0.1 nmol TCA 可溶性 DNA 所需要的酶量。
浓度
使用注意事项
Exo T 对 DNA 和 RNA 的反应效率不同,DNA 是 RNA 的 100 倍。对 RNA,在标准反应条件下,完全消化 1.0 pmol rA20 需要 1 单位 Exo T,反应结果通过凝胶电泳检测。
参考文献
有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com,www.neb.com。