特性
特异地作用于单链 DNA 或 RNA
使 DNA 或 RNA 的 3´ 突出端变为平齐末端
概述
核酸外切酶 T(Exo T)又称核糖核酸酶 T(RNase T),沿 3´ →5´ 方向特异性作用于单链 RNA 或 DNA 的 3´ 突出游离端。核酸外切酶 T 作用于 3´ 突出末端,产生平末端的 RNA 或 DNA 分子。
来源
核酸外切酶 T 与麦芽糖结合蛋白(MBP)C 端融合表达并纯化。经亲和层析纯化后,核酸外切酶 T 从 MBP 切下,N 端多出一个氨基酸,且原来的蛋氨酸由苯丙氨酸代替(即 Glu-Phe-核酸外切酶 T,替换了原来的 Met-核酸外切酶 T)。
反应条件
1X NEBuffer 4
[50 mM KAc,20 mM Tris-Ac,10 mM Mg(Ac)2,1 mM DTT(pH 7.9)],25℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
质保声明
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单位定义
1 单位指在 100 μl 反应体系中,25℃ 条件下,30 分钟内能从 1 nmol [3H]-标记的聚胸腺嘧啶核苷催化产生 0.1 nmol 的可溶于 TCA 的 DNA 所需要的酶量。
浓度
注意事项
核酸外切酶 T 对 RNA 和 DNA 具有不同的活性。对于 RNA,在标准反应条件下,通过凝胶电泳检测,1 单位核酸外切酶 T 可以完全消化 1.0 pmol 的 rA20。
参考文献
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