特性
可在高温条件下,连接 DNA 链上的切刻位点
具有极高的耐热性,与 PCR 反应条件兼容
可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测
可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变
概述
9°N? DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在 45℃-90℃ 范围内均有活性。
来源
纯化自重组 E. coli 菌株,其携带有从极度耐热的海底超嗜热古菌(Thermococcus sp.)9°N 菌株中克隆的连接酶基因。
反应条件
1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl,600 μM ATP,2.5 mM MgCl2,2.5 mM DTT,0.1% Triton X-100(pH 7.5 @ 25℃)],45℃ 温 育。
质保声明
9°N DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或www.neb-china.com。
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指 50 μl 反应体系中,45℃ 条件下,15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段(12 bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切刻封闭单位。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
浓度
注意事项
该酶可以有效连接 12 bp 的互补片段,但却无法连接 4 bp 的互补片段(典型限制酶消化产物)。
参考文献
关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。