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本制品是通过亲和色谱等方法从大肠杆菌中纯化得到的重组体。该酶的特征与猪肝和人胎盘来源的此类酶相似，与RNase A形成1：1复合体，抑制RNase活性。该反应是可逆的，通过尿素及巯基类试剂能够解离复合体，使RNase复活而抑制剂不可逆失活。使用时可直接加入含有RNA的反应液中。本品属蛋白质性质，与其它竞争性抑制剂 (核酸类、无机磷酸类) 不同，可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去。但不能抑制反转录酶的RNase H的活性。本品具有与猪肝和人胎盘来源的酶相同的应用。 |
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■ 保存 |
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-20℃。 |
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■ 起源 |
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E. coli containing a plasmid that carries the porcine RNase Inhibitor gene. |
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■ 活性定义 |
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抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位 (U)。(抑制活性通过抑制RNase A水解Cyclic2’,3’-CMP的能力确定) 。 |
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■ 纯度 |
1. 300 units的RNase Inhibitor和1 μg的λ DNA-Hind Ⅲ分解物在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 300 units的RNase Inhibitor和1 μg的超螺旋pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3. 100 units的RNase Inhibitor和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
4. SDS-PAGE：在分子量50 KDa处是单一带。 |
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■ 使用注意 |
1. 抑制RNase活性的pH值范围较广，在pH7～8时表现最适范围。
2. RNase Inhibitor发挥活性作用需要至少1 mM的DTT。 |
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■ 用途 |
1. cDNA合成反应 (Ribonuclease Inhibitor, 反应量0.5 units/μl) 。
2. 体外翻译 (Ribonuclease Inhibitor, 反应量1 unit/μl) 。
3. 体外无细胞系统转录 (Ribonuclease Inhibitor, 反应量20 units/μl) 。
4. SP6或T7 RNA聚合酶的体外转录 (Ribonuclease Inhibitor,反应量1 unit/μl) 。
5. 多核糖体分离(RNase Inhibitor，反应量1 unit/μl)。 |
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