描述:EB替代染料是一种可代替溴化乙锭(EB)的核酸染液(20000倍浓缩液),使用方法与EB完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光,而单链RNA或DNA呈橙红色荧光,其灵敏度与EB相当。小鼠皮下注射试验尚未发现此EB替代染料有致癌作用;而溴化乙锭是一种疑似致癌剂。因此可用EB替代染料代替溴化乙锭进行核酸荧光染色。
储存:4℃避光保存 一年有效
使用方法:
1. 每100ml融化的琼脂糖胶溶液中,加入2-5μlEB替代染料,轻轻摇匀。
2. 冷却至60℃左右(不烫手)时倒胶,待琼脂糖胶完全凝固后上样电泳。
3. 电泳完毕在紫外灯下观察。双链DNA呈绿色荧光,单链RNA或DNA呈橙红色荧光。按照与溴化乙锭相同的方法进行荧光照相。
4. 也可直接进行不含染料的琼脂糖胶电泳,电泳后将凝胶放入加有2-5μl EB替代染料/100ml电泳缓冲液或蒸馏水中染色10分钟。
注意事项:
1. 胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. EB替代染料可使核酸电泳迁移速率略有加快。
3. 照像记录时用红色滤光片效果会更好一些。
4. 虽然尚未发现EB替代染料有致癌作用,但作为有机化学试剂可能有其它未曾检测到的轻微毒性。操作时仍应戴手套进行防护。
5. 染色过度可用蒸馏水脱色,染色不足可以加入较多的染料。
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