■ 产品概述

本产品是利用 M-MLV 反转录聚合酶的反转录试剂盒，cDNA 产物可直接用于 qPCR 检测。本制品是在 Evo M-MLV RT Kit with gDNA Clean for qPCR Ⅱ（Code. AG11711）的基础上将去除基因组及反转录体系均配制成预混液，使用方便，可减少试剂损失及实验误差。该制品中 5X gDNA Clean Reaction Mix 可去除残留的基因组 DNA，保证定量结果的准确性， 5X Evo M-MLV RT Reaction Mix 中包含反转录反应所需的所有组分，并针对 Oligo dT (18T) Primer、Random 6 mers Primer 用量进行了优化，使反转录产物兼容嵌合法和探针法 qPCR 分析，能够进行高效的基因表达分析。

■ 产品优势

1.含有基因组 DNA 去除试剂 5X gDNA Clean Reaction Mix，能够快速的去除 RNA 模板中混有的基因组 DNA。
2.试剂盒中将去除基因组及反转录体系分别配制成预混液，使用方便，可减少试剂损失及实验误差。
3.本制品反转得到的 cDNA 同时可以适用于 SYBR 法和探针法 qPCR 分析。

■ 产品组成

*1：含有 Evo M-MLV RTase、RNase Inhibitor、dNTPs、Oligo dT (18T) Primer与 Random 6 mers Primer。

■ 实验示例

1、 向小鼠肝脏 Total RNA（分别为 2μg 、200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg、0 pg）中分别加入 200 ng 的小鼠基因组 DNA，使用本试剂盒去除基因组 DNA，然后进行反转录实验，并以此 cDNA 为模板，取 2μl 的 cDNA 原液，用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测小鼠的 malat1 基因。

结果如上图所示：
①工作曲线 R²=0.9974，扩增效率是 98.70%。
②不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2 μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

2、 向 293T 细胞 Total RNA（分别为 200 ng、20 ng、2 ng、200 pg、20 pg、2 pg 、0pg）分别加入 200 ng 的人基因组 DNA，使用本试剂盒去除基因组 DNA，然后进行反转录实验，并以此 cDNA 为模板，取 2μl 的 cDNA 原液，用 SYBR® Green Pro Taq HS 预混型qPCR 试剂盒(Code. AG11701)进行 qPCR 扩增检测 AP1 基因。

结果如上图所示：
①工作曲线 R²=0.999，扩增效率是 102%。
②不加 RNA 但添加 gDNA 样品中，Ct 值在 35 cycles 以内没有检出。
③本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，200 ng ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。
④熔解曲线峰型单一，扩增特异性好。

3、 使用本制品对小鼠肝脏 Total RNA 进行反转录，Total RNA 起始量 2μg~2 pg。以反转录产物 cDNA 为模板，取 2μl 的 cDNA 原液，利用探针法 qPCR 检测 ApoE 基因（qPCR使用 Pro Taq HS Premix Probe qPCR Kit, Code. AG11704 进行）。

结果如上图所示：
①工作曲线 R²=0.9973，扩增效率为 105%；
②本制品的反转效率高，能在宽广的模板范围内进行准确的定量，2μg ~ 2 pg Total RNA 反转录获得的 cDNA 扩增曲线呈现良好的线性关系。

■ 保 存

保存温度：-20℃
运输温度：干冰或者 -20℃ 冰袋