产品组分：

大肠表达感受态的制备：

    1. 活化菌种。-80℃保存的菌种在LB固体培养基上划线，37℃过夜；

    2. 挑取单菌落接种到3ml 大肠表达培养基中，37℃，220过夜培养；

3. 第二天转接2ml到含有200ml 大肠表达培养基的三角瓶中，37℃，220rpm，直至OD600=0.5~0.6，收集细胞，5000rpm，4℃，离心5min， 去上清；

4. 沉淀用54ml的冰预冷的大肠A1轻柔吹悬；

5. 冰浴30min，5000rpm，4℃，离心5min， 去上清；

  6. 沉淀用10ml的冰预冷的大肠A2轻柔吹悬；

7. 把大肠表达感受态细胞悬浮液分装到1.5ml离心管中，每管分装100μl，用于转化一个质粒即一个反应。或保存于-80℃，避免反复冻融。

转化方法：

1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5min后待菌块融化，加入目的DNA质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置30min；

2. 42℃水浴热激45-90s，迅速放回冰中并静置5min，晃动会降低转化效率；

3. 向离心管中加入800 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60min；

4. 6000 rpm离心5min收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上；

     5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 大肠表达培养基称量后加去离子水，于121℃高温高压灭菌15min，冷却后使用。 

2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8min内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 

3. 混入质粒时应轻柔操作。 

4. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。