概述

pEGFP-C3编码野生型GFP（1-3）的红移变体，该变体已经过优化，可以在哺乳动物细胞中产生更亮的荧光和更高的表达。（最大激发波长= 488 nm；最大发射波长= 507 nm。）pEGFP-C3编码GFPmut1变体（4），其中包含Phe-64取代为Leu和Ser-65取代为Thr的双氨基酸。EGFP基因的编码序列包含超过190个沉默碱基的变化，这些变化对应于人类密码子使用偏好（5）。EGFP侧翼的序列已转化为Kozak共有翻译起始位点（6），以进一步提高真核细胞的翻译效率。pEGFP-C3中的MCS在EGFP编码序列和SV40 poly A之间。如果克隆到MCS中的基因与EGFP在同一阅读框中，并且没有中间的终止密码子，则将被表达为与EGFP C末端的融合体。EGFP基因下游的SV40聚腺苷酸信号指导EGFP mRNA 3'末端的正确加工。载体主链还包含SV40起点，用于在表达SV40 T抗原的哺乳动物细胞中复制。新霉素抗性盒（Neor）由SV40早期启动子，Tn5的新霉素/卡那霉素抗性基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV TK）基因的聚腺苷酸信号组成，可使用G418选择稳定转染的真核细胞。该盒上游的细菌启动子在大肠杆菌中表达卡那霉素抗性。

应用

与EGFP C末端的融合蛋白保留了天然蛋白的荧光特性，从而使融合蛋白能够在体内定位。应将靶基因克隆到pEGFP-C3中，使其与EGFP编码序列符合读框，且无插入框内的终止密码子。可以使用任何标准转染方法将重组EGFP载体转染到哺乳动物细胞中。如果需要，可以使用G418（7）选择稳定的转化子。pEGFP-C3也可以简单地用于在目标细胞系中表达EGFP（例如，作为转染标记）。

技术规格