当培养的大肠杆菌的温度充分降低,几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少,而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。 冷休克表达载体,pCold I-IV,是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处,插入了lac操纵子,以便严格控制表达。此外,5'非翻译区(5'UTR),翻译增强元件(TEE),His标签序列,Xa因 子切割位点和多克隆位点(MCS)位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子,大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体,他们的下列原件的位置稍有不同,TEE,His标签序列和Factor XA酶切位点。
质粒类型 | 大肠杆菌冷激表达载体 |
表达水平 | 高 |
启动子 | CSPA |
克隆方法 | 多克隆位点,限制性内切酶 |
载体大小 | 4392bp |
5'测序引物及序列 | pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3' |
3'测序引物及序列 | pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3' |
载体标签 | N-His |
载体抗性 | 氨苄青霉素(Ampicillin) |
备注 | 温度诱导,冷休克蛋白表达载体 |
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