碧云天生产的5'DNA Adenylation Kit，即5’DNA腺苷酰化试剂盒，是一种非常便捷和高效的通过酶学方法将单链DNA (ssDNA) 5’端腺苷酰化修饰的试剂盒。

本试剂盒制备产生的5’端腺苷酰化修饰的单链DNA，常用于miRNA等3’端为羟基的RNA或3’端为羟基的单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时，在3’端添加的接头。

本试剂盒进行腺苷酰化修饰反应时，需要腺苷酰化酶(Adenylase)、ATP和待腺苷酰化修饰的5’端磷酸化的单链DNA。

本试剂盒腺苷酰化修饰效率高，通常可以达到95%以上。对5’端磷酸化的单链DNA进行腺苷酰化修饰反应时，无论该单链DNA的3’端是否进行了氨基化等封闭都可以得到高产量的腺苷酰化产物。通常本试剂盒能将95%以上的5’端磷酸化的DNA (pDNA)转化成腺苷酰化DNA (AppDNA)，因此腺苷酰化的产物通常不需要进行电泳切胶回收，可以直接通常乙醇沉淀进行进一步浓缩后用于后续的连接反应。

本产品以5’端磷酸化的单链DNA为底物，腺苷酰化酶将ATP分解成AMP和PPi，AMP转移到单链DNA的5’磷酸基团上，形成腺苷酰化单链DNA，从而制备出腺苷酰化接头(linker)。

本试剂盒催化5’端磷酸化单链DNA生成5’端腺苷酰化修饰单链DNA的效果参见图1。

图1. 使用碧云天生产的5’ DNA Adenylation Kit制备5’端腺苷酰化修饰单链DNA的效果图。反应体系为20μl，单链DNA的终浓度为5μM，反应条件为65ºC分别孵育15、30、45、60和90min，反应完毕后85℃孵育5min终止反应。电泳上样前95℃孵育5min随后置于冰浴以充分变性，尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行凝胶电泳分析。如图所示，本试剂盒在15min内就可以将大部分5’端磷酸化单链DNA (pDNA)催化生成腺苷酰化的单链DNA (AppDNA)，孵育60min可以确保将95%以上的底物转化成腺苷酰化修饰的单链DNA。

本产品也可以用于5’端磷酸化的单链RNA的5’端腺苷酰化修饰，可根据具体应用选择合适的实验步骤，同时需要额外准备R0102 RNase Inhibitor和R0021 DEPC水等。

本产品包含的Adenylase来源为嗜热古细菌，在大肠杆菌中进行表达而获得。

优点：单步反应即可完成5’端磷酸化修饰的单链DNA或RNA的腺苷酰化修饰，与传统的化学方法相比较，更加简便；对于底物转化效率高达95%以上，无需切胶纯化仅需酒精沉淀等即可用于后续反应；在65℃这样一个较高的温度反应，可以有效避免二级结构对于5’端腺苷酰化修饰反应的干扰；适用于pmol级别底物量的反应体系，也可以很方便地放大至µmol级别底物量的反应体系。

-20℃保存，至少一年有效。

底物单链DNA或单链RNA的5’端磷酸化是必须的，3’端可以进行氨基化等封闭，也可以不封闭。

本试剂盒提供的腺苷酰化反应体系可以按比例放大反应体系，对腺苷酰化产物的得率无显著影响。

本试剂盒提供的Adenylase的最佳反应温度为65℃，并且在25℃时会出现去腺苷酰化现象，因此反应完成后推荐在85℃孵育5min以失活Adenylase。如果没有失活Adenylase，后续经历室温温度条件时，会导致腺苷酰化比率下降。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。