pCMV-C-mOrange2是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含mOrange2标签的融合蛋白。mOrange2蛋白是一种极其明亮的桔色荧光蛋白,与mOrange蛋白相比,其蛋白稳定性得以提高。
pCMV-C-mOrange2含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。pCMV-C-mOrange2在多克隆位点的后面有一个mOrange2的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有mOrange2标签的融合蛋白。利用mOrange2的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mOrange2抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mOrange2与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mOrange2,但可以尝试使用抗mcherry的抗体检测mOrange2。
pCMV-C-mOrange2为卡那霉素抗性,并且含有Neomycin筛选标记,转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-mOrange2质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 1-602 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
Multiple cloning site | 651-740 |
mOrange2 | 741-1448 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 1498-1519 |
SV40 polyA signal | 1531-1914 |
f1 origin of ss-DNA replication | 2052-2356 |
bla promoter | 2381-2505 |
SV40 promoter | 2525-2863 |
Neomycin/kanamycin resistance ORF | 2898-3689 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3690-4148 |
pUC origin | 4277-4944 |
pCMV-C-mOrange2质粒(4996bp)的图谱如下:
pCMV-C-mOrange2质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2625 pCMV-C-mOrange2.pdf。
pCMV-C-mOrange2中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-mOrange2)包括:
AclI | AfeI | AgeI | AhdI | AscI | AsiSI | BbsI |
BcgI | BlpI | BmgBI | Bpu10I | BsiWI | BsmBI | BspEI |
BsrGI | BssHII | BstZ17I | EarI | EcoNI | Esp3I | FseI |
PmeI | PmlI | PpuMI | PshAI | PspXI | SapI | SbfI |
SgrAI | SpeI | SwaI | XcmI |
pCMV-C-mOrange2中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-mOrange2 once)包括:
AccI | GT`MK,AC | 718 | MluI | A’CGCG,T | 1914 |
AflII | C’TTAA,G | 1251 | MscI | TGG|CCA | 3108 |
AleI | CACNN|NNGTG | 661 | NarI | GG’CG,CC | 3026 |
ApaI | G,GGCC’C | 1453 | NheI | G’CTAG,C | 597 |
ApaLI | G’TGCA,C | 4630 | NotI | GC’GGCC,GC | 668 |
BaeI | ,N)5’(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5’ | 1185 | PaeR7I | C’TCGA,G | 729 |
BamHI | G’GATC,C | 687 | PciI | A’CATGT | 4944 |
BclI | T’GATC,A | 1685 | PflFI | CCAN,NNN’NTGG | 3144 |
BglII | A’GATC,T | 723 | PflMI | G,GCGC’C | 1146 |
BmtI | G,CTAG’C | 601 | PluTI | G,GCGC’C | 3029 |
BsaI | GGTCTCN’NNNN, | 4015 | PspOMI | G’GGCC,C | 1449 |
BsaXI | ,NNN’(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN’ | 2078 | PstI | C’TGCA,G | 703 |
BseRI | GAGGAG(N)8,NN’ | 2844 | PvuI | CG,AT’CG | 1531 |
BsgI | GTGCAG(N)14,NN’ | 1420 | RsrII | CG’GWC,CG | 3524 |
BspDI | AT’CG,AT | 2866 | SacI | G,AGCT’C | 655 |
BstBI | TT’CG,AA | 3708 | SacII | CC,GC’GG | 662 |
BstEII | G’GTNAC,C | 893 | SalI | G’TCGA,C | 717 |
BstXI | CCAN,NNNN’NTGG | 663 | SfiI | GGCCN,NNN’NGGCC | 2801 |
BtsI | GCAGTG,NN’ | 1867 | SfoI | GGC|GCC | 3027 |
ClaI | AT’CG,AT | 2866 | SmaI | CCC|GGG | 682 |
CspCI | ,NN’(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN’ | 382 | SnaBI | TAC|GTA | 346 |
DraIII | CAC,NNN’GTG | 2144 | SrfI | GCCC|GGGC | 682 |
Eco53kI | GAG|CTC | 653 | StuI | AGG|CCT | 2847 |
EcoRI | G’AATT,C | 705 | TspMI | C’CCGG,G | 680 |
EcoRV | GAT|ATC | 713 | Tth111I | GACN’N,NGTC | 3144 |
HindIII | A’AGCT,T | 693 | XbaI | T’CTAG,A | 735 |
HpaI | CC,TGCA`GG | 1791 | XhoI | C’TCGA,G | 729 |
KasI | G’GCGC,C | 3025 | XmaI | C’CCGG,G | 680 |
MfeI | C’AATT,G | 1778 | XmnI | GAANN|NNTTC | 871 |
pCMV-C-mOrange2质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620-639): 5'-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3'
C-mOrange2 primer (852-873): 5'- AACCTTCGTATGGACGACCTTC -3'
pCMV-C-mOrange2的全序列信息:D2625序列信息.txt
pCMV-C-mOrange2质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-C-mOrange2质粒转染HEK293T细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2625-1µg | pCMV-C-mOrange2 (橙色荧光蛋白) | 1μg |
D2625-100µg | pCMV-C-mOrange2 (橙色荧光蛋白) | 100µg |
— | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项:本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2602-1µg | pCMV-Blank | 1µg |
D2602-100µg | pCMV-Blank | 100µg |
D2621-1µg | pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) | 1µg |
D2621-100µg | pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) | 100µg |
D2623-1µg | pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) | 1µg |
D2623-100µg | pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) | 100µg |
D2624-1µg | pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) | 1µg |
D2624-100µg | pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) | 100µg |
D2626-1µg | pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) | 1µg |
D2626-100µg | pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) | 100µg |
D2628-1µg | pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) | 1µg |
D2628-100µg | pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) | 100µg |
D2630-1µg | pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) | 1µg |
D2630-100µg | pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) | 100µg |
D2632-1µg | pCMV-C-Flag | 1µg |
D2632-100µg | pCMV-C-Flag | 100µg |
D2639-1µg | pCMV-C-HA | 1µg |
D2639-100µg | pCMV-C-HA | 100µg |
D2650-1µg | pCMV-C-His | 1µg |
D2650-100µg | pCMV-C-His | 100µg |
D2672-1µg | pCMV-C-Myc | 1µg |
D2672-100µg | pCMV-C-Myc | 100µg |
D2701-1µg | pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) | 1µg |
D2701-100µg | pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) | 100µg |
D2703-1µg | pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) | 1µg |
D2703-100µg | pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) | 100µg |
D2705-1µg | pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) | 1µg |
D2705-100µg | pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) | 100µg |
D2707-1µg | pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) | 1µg |
D2707-100µg | pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) | 100µg |
D2711-1µg | pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) | 1µg |
D2711-100µg | pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) | 100µg |
D2713-1µg | pCMV-N-mOrange2(橙色荧光蛋白) | 1µg |
D2713-100µg | pCMV-N-mOrange2 (橙色荧光蛋白) | 100µg |
D2716-1µg | pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) | 1µg |
D2716-100µg | pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) | 100µg |
D2722-1µg | pCMV-N-Flag | 1µg |
D2722-100µg | pCMV-N-Flag | 100µg |
D2733-1µg | pCMV-N-HA | 1µg |
D2733-100µg | pCMV-N-HA | 100µg |
D2737-1µg | pCMV-N-His | 1µg |
D2737-100µg | pCMV-N-His | 100µg |
D2756-1µg | pCMV-N-Myc | 1µg |
D2756-100µg | pCMV-N-Myc | 100µg |
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