Reverse Transcription Kit (with dsDNase)
反转录试剂盒(含热敏双链DNA酶)
产品名称 | 规格 | |
BL696A | 反转录试剂盒(含热敏双链DNA酶) | 100T |
产品简介:
本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组 DNA 污染的反转录系统,只需加入模板 RNA 和水即可进行反应,合成的第一链cDNA可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR扩增、RT-qPCR检测等。5×Reaction Mix包含反转录反应所需的缓冲液,dNTPs及优化的反转录引物,Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase, Ribonuclease Inhibitor和dsDNase,简化了加样步骤。试剂盒采用的反转录酶去除了RNase H活性,且热稳定性更强,可耐受55℃反应,提高复杂RNA模板的反转录效率。该反转录酶产物得率更高,获得的cDNA片段更长,模板使用范围更广。
dsDNase为新型热敏双链特异性核酸酶,可在反转录过程中直接降解去除RNA样品中残留的基因组DNA(gDNA)污染,而不消化RNA样品、反转录引物及合成的cDNA。并且该酶具有热敏感性,可在55℃快速不可逆失活,实现去除基因组污染与反转录反应的同步进行。
产品组成:
组分 | 100T |
5× Reaction Mix | 400 μl |
Enzyme Mix | 300 μl |
DEPC-treated Water | 2×1 ml |
使用方法:
1、将模板RNA和试剂在冰上解冻,使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2、在RNase free管中冰上配制以下反应体系:
组分 | 体积 |
Total RNA/mRNA | As Required* |
DEPC-treated Water | Up to 13 μl |
5× Reaction Mix | 4 μl |
Enzyme Mix | 3 μl |
*:Total RNA建议用量为10 pg-5 μg,mRNA建议用量为10 pg-500 ng,为保证反转录成功,请使用高质量RNA模板。
温度 | 时间 | 说明 |
25℃ | 10min | 随机引物与RNA模板配对,去除基因组DNA |
55℃ | 15min | 反转录反应及dsDNase快速灭活 |
85℃ | 5min | 反转录酶灭活 |
3、移液器轻轻吹打混匀,运行如下程序
4、得到的cDNA产物可立即用于PCR或qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。
注意事项:
1、避免RNase污染。
2、为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3、5× Reaction Mix及Enzyme Mix易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请瞬时离心,并避免吸头外壁沾附损失。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存方法:
避免反复冻融,-20 ℃保存2年。
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