1.电泳结束后,取凝胶放入约100ml固定液中,在摇床上室温摇动20分钟,摇动速度为60-70rpm。
固定液的配制(自备):加入50ml乙醇、10ml冰乙酸和40ml 去离子水,混匀。
2.弃固定液,加入100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动10min,摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制(自备):70ml 去离子水中加入30ml乙醇,混匀。
3.弃30%乙醇,加入200ml去离子水,在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。
4.弃水,加入100ml增敏液(1×),在摇床上室温摇动2分钟,摇动速度为60-70rpm。
增敏液(1×)的配制:99ml去离子水中加入1ml增敏液(100×),混匀。增敏液(1×)配制后需在2小时内使用。
5.弃原有溶液,加入200ml 去离子水,在摇床上室温摇动1min×2,摇动速度为60-70rpm。
6.弃水,加入100ml银染液(1×),在摇床上室温摇动20分钟,摇动速度为60-70rpm。
银染液(1×)的配制:99ml 去离子水中加入1ml银染液(100×),混匀。银染液(1X)配制后需在2小时内使用。
7.弃原有溶液,加入100ml 去离子水,在摇床上室温摇动0.5min×2,摇动速度为60-70rpm。
8.弃水,加入100ml显色液,在摇床上室温摇动3-10分钟,直至出现比较理想的预期蛋白条带,摇动速度为60-70rpm。
显色液的配制:80ml 去离子水中加入20ml显色液B(5×),再加入0.05ml显色液A,混匀后即为显色液。显色液配制后需在20分钟内使用。
9.弃显色液,加入100ml终止液,在摇床上室温摇动10分钟,摇动速度为60-70rpm。
终止液的配制(自备):95ml 去离子水中加入5ml冰乙酸,混匀。
10.弃终止液,加入去离子水,在摇床上室温摇动2-5分钟,摇动速度为60-70rpm。
11.保存显色出的蛋白质条带并记录。
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