Western封闭液                        100ml

Western洗涤液                        100ml（10×）

Western一抗二抗稀释液           100ml×2  

按照每次Western blot需要封闭液10ml、一抗稀释液10ml、二抗稀释液10ml、洗涤液30ml+30ml+30ml=90ml，约100ml计算，一个包装的本试剂盒，大约可以进行10次Western Blot检测。

       Western溶液套装是一种包含了Western Blot实验过程中常用的封闭液、洗涤液、一抗和二抗稀释液的溶液套装。

       本产品中的一抗二抗稀释液可以用于Western时一抗和二抗的稀释和配制。其主要有效成分为经过反复优化的适量BSA、适当的去垢剂和抗体稳定试剂等，一方面能有效减少一抗二抗的非特异性结合，另一方面能有效提升稀释后抗体的稳定保存时间。使用本Western一抗二抗稀释液稀释的一抗可以在4℃保存和使用不少于六个月，可以反复多次用于Western。经本Western一抗二抗稀释液稀释的二抗可以在1-2周内重复使用3-5次。
      本产品中的Western封闭液可以用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜的封闭。其主要有效成分为经过反复优化的适量BSA和适当的去垢剂等，一方面能有效封闭膜上的蛋白结合位点，另一方面能有效减少后续一抗和二抗的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。
      本产品中的Western洗涤液(10X)可以用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤。适当的洗涤可以降低背景，增强信噪比。

1.取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
2.PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转模液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异常背景。
3.为了能使抗体可以反复多次使用，建议尽量在4℃进行一抗和蛋白膜的结合反应，以减缓一抗的衰减速度。
4.通常在室温封闭60分钟即可。如果对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。
5.本Western洗涤液(10X)用蒸馏水稀释后使用，配制成Western洗涤液(1X)后，宜4℃保存，并在1-2个月内用完，如果室温保存，宜在1-2周内用完。

1.Western一抗二抗稀释液
       a.参考所用的一抗的使用说明，以及样品中目的蛋白的含量，按照适当比例稀释一抗，一抗稀释后即可直接用于Western。一次Western结束后，可以回收稀释的一抗，4℃保存，以用于下次的Western。

       b.参考所用的二抗的使用说明，以及一抗的质量和样品中目的蛋白的含量，按照适当比例稀释二抗，二抗稀释后即可直接用于Western。一次Western结束后，可以回收稀释的二抗，4℃保存，以用于下次的Western，通常在1-2周内可以重复使用3-5次。
2.Western封闭液
完成转膜后，用稀释好的Western洗涤液洗涤膜，共洗涤3次，每次5分钟，加入Western封闭液，封闭60分钟，然后进行一抗孵育等后续操作。
3.Western洗涤液(10X)
       a.取一瓶Western洗涤液(10X)，倒入到一洁净的量筒中，加入蒸馏水混匀并定容到1升后即为Western洗涤液(1X)，并可以用于Western的洗涤。没有用完的洗涤液可以室温保存，通常1-2周内是可以正常使用的。如果发现洗涤液出现浑浊、沉淀等异常现象，宜废弃。
       b.在一抗或二抗孵育结束后，加入少量Western洗涤液(1X)，使之能盖住膜，在摇床上洗涤，共洗涤3次，每次5分钟，然后进行后续的操作。如果按照上述洗涤条件Western结果背景仍然较高，可以适当延长洗涤时间，并增加洗涤次数。通常，延长洗涤时间或增加洗涤次数不会对Western结果产生负面影响。