注意事项:
1.过硫酸铵配制成10%溶液后,应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。
2.TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3.TEMED有腐蚀性,请注意防护。
使用方法:
1.根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:
蛋白质分子量范围(KD) | 适宜的凝胶浓度(%) |
>100 | 8 |
30-100 | 10 |
10-30 | 12 |
<10 | 15 |
2.按照下表配制SDS-PAGE分离胶
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成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
6%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 | 20.0 |
30%Acr-Bis(29:1) | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 6.0 | 10.0 |
1.5M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.004 | 0.008 | 0.012 | 0.016 | 0.024 | 0.04 |
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
8%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 1.7 | 3.3 | 5 |
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