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| 产品描述 | 应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔 |
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一、配制BSA标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考下表。
Vial | 稀释液体积(μl) | 2mg/ml BSA体积(μl) | BSA终浓度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank（空白孔） |
A. 试管法检测（线性范围：100-1500μg/ml）
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2.加入1ml Bradford染色液，混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定595nm处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B. 标准微孔板检测（线性范围：100-1500μg/ml）
2.每孔加入250μl Bradford染色液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4.根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/ml；Y-最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μl标准品/待检样本，和250μl Bradford染色液来进行检测。
附录 ：蛋白浓度测定的兼容性
名称（盐/缓冲液） | 耐受浓度 |
ACES, pH 7.8 | 100mM |
Ammonium sulfate | 1M |
Asparagine | 10mM |
Bicine, pH 8.4 | 100mM |
Bis-Tris, pH 6.5 | 100mM |
Borate (50mM), pH 8.5 | undiluted |
Calcium chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4 | undiluted |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHES, pH 9.0 | 100mM |
Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0 | undiluted |
Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5 | undiluted |
Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
EPPS, pH 8.0 | 100mM |
Ferric chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Glycine | 100mM |
Guanidine?HCl | 3.5M |
HEPES, pH 7.5 | 100mM |
Imidazole, pH 7.0 | 200mM |
MES, pH 6.1 | 100mM |
MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7 | undiluted |
MOPS, pH 7.2 | 100mM |
Nickel chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2 | undiluted |
PIPES, pH 6.8 | 100mM |
RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5% DOC,1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 | 1/10 dilution* |
Sodium acetate, pH 4.8 | 180mM |
Sodium azide | 0.5% |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium chloride | 5.0M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200mM |
Sodium phosphate | 100mM |
Tricine, pH 8.0 | 100mM |
Triethanolamine, pH 7.8 |
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