产品简介:
ER-Tracker Red是一种内质网(endoplasmic reticulum,ER)红色荧光探针,可以用于活细胞内质网特异性荧光染色。
ER-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的BODIPY TR进行了荧光标记的glibenclamide,分子量为915.23。Glibenclamide即glyburide,中文名为格列苯脲,是一种2型糖尿病治疗药物,可以结合主要定位在内质网上的sulphonylurea受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。
ER-Tracker Red对于细胞的毒性极低。而传统的DiOC6(3)对ER染色的同时也对细胞有一定的毒性。
ER-Tracker Red呈红色荧光,检测时的最大激发波长为587nm,最大发射波长为615nm。ER-Tracker Red按照后附的使用说明染色后,用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留。
提供了ER-Tracker Red 稀释液,使ER-Tracker Red的使用更加便捷。
按照1:1000的比例稀释,可以配制20ml ER-Tracker Red工作液;按照1:3000的比例稀释,可以配制60ml ER-Tracker Red工作液。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
C1041-1 | ER-Tracker Red(1mM) | 20μl |
C1041-2 | ER-Tracker Red稀释液 | 60ml |
- | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,半年有效。ER-Tracker Red需-20℃避光保存。
注意事项:
ER-Tracker Red(1mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体,每次使用前先离心数秒钟,使液体充分沉降到管底。
荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
需自备盖玻片和载玻片(可以向碧云天订购)。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. ER-Tracker Red工作液的配制:
a. 取少量ER-Tracker Red按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Red 稀释液中。例如取1μl ER-Tracker
Red加入到1ml ER-Tracker Red 稀释液中。混匀后即为ER-Tracker Red工作液。
b. ER-Tracker Red工作液使用前需37℃预温育。
注:工作液中ER-Tracker Red的浓度可以根据实际情况进行适当调整,推荐的稀释比例调整范围为
1:1000-1:3000。为降低背景,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的ER-Tracker
Red。
2. 内质网的荧光标记:
a. 去除细胞培养液,用适量的溶液如HBSS with Ca2+ & Mg2+ (Hanks' Balanced Salt Solution with
Ca2+ & Mg2+)洗涤生长在盖玻片上的细胞。注:HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向碧云天订购;
对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。
b. 去除洗涤液,加入步骤1配制好的并37℃预温育的ER-Tracker Red染色工作液,与细胞37℃共孵育
15-30分钟。
c. 去除ER-Tracker Red染色工作液,用细胞培养液洗涤细胞1-2次。
d. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。
e. 如需固定,可以使用4%甲醛37℃固定2分钟。固定后用适当的洗涤液洗涤2-3次,每次5分钟,随后可
以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液,最后封片观察。注意:ER-Tracker Red染色的细胞不能
用Triton X-100通透,Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Red的荧光染色消失。
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