产品简介：

    碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
    细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时
抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
    本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有 DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性好：TUNEL检测时通常更
容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
    TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时
的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
    极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
    本试剂盒足够检测20个样品。
包装清单：

保存条件：
    -20℃保存，DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。
注意事项：
    需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液，用于固
定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。 需自备过氧化氢，除石蜡切片外需自备甲醇。
    如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 对于贴壁细胞或细胞涂片：
   a. 用PBS或HBSS洗涤1次。
   b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。
   c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
   d. 用PBS或HBSS洗涤1次。
   e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
   f. 用PBS或HBSS洗涤1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源
      的过氧化物酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。
   h. 转步骤5。
2. 对于悬浮细胞或细胞悬液：
   a. 收集细胞(不超过200万细胞)，用PBS或HBSS洗涤1次。
   b. 涂片，使细胞粘附在载玻片上。可以干燥样品使细胞贴得更牢，或使用适当的粘附试剂。
   c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
   d. 用PBS或HBSS洗涤1次。
   e. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)重悬细胞，冰浴孵育2分
      钟。
   f. 用PBS或HBSS洗涤1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源
      的过氧化物酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。
   h. 转步骤5。
3. 对于石蜡切片：
   a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。
      70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
   b. 滴加20µg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自
      行摸索)。
   c. 用PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
   d. 再用PBS配制的3%过氧化氢溶液(3% H₂O₂ in PBS)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源的过氧化物
      酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。注：请勿在用PBS配制的3%过氧化氢溶液中孵育过长时间，否则会
      出现过氧化氢导致的DNA断裂，从而产生假阳性。
   e. 转步骤5。
4. 对于冷冻切片：
   a. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
   b. PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。
   c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
   d. 再用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源
      的过氧化物酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。
   e. 转步骤5。
5. 配制生物素标记液：
   参考下表配制适量的生物素标记液，需充分混匀。注意：配制好的生物素标记液必须一次使用完
   毕，不宜冻存。