产品简介：

    碧云天生产的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应，洗涤后就可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到呈现绿色荧光的凋亡细胞。
    细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时
抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(TdT--mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。注：FITC是fluorescein isothiocyanate的缩写，实际上大多数情况下所谓的FITC即为fluorescein。
    本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色明亮，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有
DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3)快速：仅需约1-2个小时即可完成。(4)方便：只需一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。(5)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
    TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时
的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
    极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。
    本试剂盒足够检测20个样品。
包装清单：

保存条件：
    -20℃保存，荧光标记液需避光保存。
注意事项：
    需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。
    如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
    本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 对于贴壁细胞或细胞涂片：
   a. PBS或HBSS洗涤一次。
   b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。
   c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
   d. 用PBS或HBSS洗涤一次。
   e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
   f. 转步骤5。
2. 对于悬浮细胞或细胞悬液：
   a. 收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。
   b. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成
      团，宜在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。
   c. 用PBS或HBSS洗涤一次。
   d. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)重悬细胞，冰浴孵育2分
      钟。
   e. 转步骤5。
3. 对于石蜡切片：
   a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分
      钟。70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
   b. 滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需
      自行摸索)。
   c. PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
   d. 转步骤5。
4. 对于冷冻切片：
   a. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
   b. PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。
   c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。
   d. 转步骤5。
5. 配制TUNEL检测液：
   参考下表配制适当量的TUNEL检测液，需充分混匀。注意：配制好的TUNEL检测液必须一次使用完
   毕，不能冻存。