产品简介:
T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3'RNA聚合酶。T7 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
特点:T7 RNA Polymerase可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T7启动子有高度的特异性。
用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay),反义RNA合成,作为体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体T7 RNA Polymerase基因。
活性定义: 37℃60分钟内,催化1 nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T7 RNA Polymerase promoter sequence。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
酶储存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。
失活或抑制:70℃加热10分钟可使T7 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。
T7的consensus promotersequence如下:
-15 -10 -5 +1 +5
TAATACGACTCACTATAGGGAGA
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D7069-1 | T7 RNA Polymerase(20U/μl) | 1000U |
D7069-2 | Transcription Buffer(5X) | 0.4ml |
- | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. RNA合成:
a. DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
b. 酚/氯仿抽提DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的DNA纯化试
剂盒,例如碧云天的DNA纯化试剂盒(D0033),直接进行纯化,从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些
步骤。
c. 参考如下表格设置反应体系:
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