产品简介：

    快速DNA连接试剂盒(Rapid DNA Ligation Kit)是碧云天研发的一种把DNA片段在短至5分钟内快速插入
到载体(vector)中的连接试剂盒。对于双粘端DNA片段的插入仅需5分钟即可完成，对于双平端DNA片段的插入仅需15分钟即可完成。同时本试剂盒也可以用于其它各种常规的双链DNA连接反应。
    本试剂盒可以用于PCR片段和载体的连接、酶切产物和载体的连接、linker和载体的连接、linker和l
inker的连接等各种双链DNA的连接。
    为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力DNA连接酶，即Rapid T4 DNA
ligase，确保在短时间内可以获得很好的连接效果。
    为了方便后续连接产物转化细菌，碧云天对本试剂盒的快速连接缓冲液进行了优化，在确保连接效果的同时，确保完成连接后不必进行任何纯化即可直接转化细菌。另外，快速连接缓冲液中已经含有ATP、镁离子等各种必需物质，无需再添加其它任何试剂。
    本试剂盒用于总体积为10μl的连接体系时可以进行500个连接反应，用于总体积为20μl的连接体系时
可以进行250个连接反应。
包装清单：

保存条件：
    -20℃保存。
注意事项：
    连接反应完成后即可直接转化细菌，请勿采用加热方法失活Rapid T4 DNA ligase。加热处理会导致后续的转化效率显著下降。
    对于载体单酶切插入外源片段的情况，需注意对载体进行脱磷处理，以避免质粒自连。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

使用说明：
1. PCR产物或酶切片段和普通载体的连接：
   a. 取1-2μg载体酶切过夜，或至少酶切3-5小时以上。尽量确保酶切充分，否则后续会导致产生很多
      自连的克隆。
   b. 载体酶切完毕后，可以使用试剂盒进行纯化，例如碧云天的PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒
      (D0033)。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化载体。对于酶切产生较大片段(大于50-
      60bp)的情况推荐采用切胶回收的方式。
   c. 对于PCR产物：PCR产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的DNA片段。凝胶中DNA片段的回收可以使
      用试剂盒进行操作，例如碧云天的DNA凝胶回收试剂盒(D0056)。也可以采用反复冻融等方法回收
      DNA片段。
   d. 对于回收的PCR产物或其它需酶切的质粒或DNA片段，用适当内切酶酶切，随后纯化酶切产物。
      注：这一步的酶切不必酶切特别充分，通常酶切效率能达到80-90%以上即可。即本步骤的酶切
      通常酶切1-2小时即可。酶切产物可以使用试剂盒进行纯化，例如碧云天的PCR纯化试剂盒/DNA纯
      化试剂盒(D0033)。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化载体。
   e. 取约25-100ng经过酶切和纯化的载体，加入3倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体
      系。
      注：很多时候由于载体量和待插入片段的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前
      电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以DNA分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定
      量您的目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计
      算出最终得到的载体量和待插入片段量的比例关系。