产品简介:
碧云天生产的哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit),采用了经典的蛋白酶K处理法,可以抽提到100-150kb以上的基因组DNA。
用本试剂盒抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。
通常使用本试剂盒,从20毫克组织可以抽提到约40微克基因组DNA,从106-107Hela细胞可以抽提到约5-50微克基因组DNA。
本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D0061-1 | 样品裂解液 | 30ml |
D0061-2 | 蛋白酶K | 130μl |
D0061-3 | 10M 醋酸铵 | 6ml |
D0061-4 | Nuclease Free Water | 6ml |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。10M醋酸铵和Nuclease Free Water也可以室温保存。
注意事项:
需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
如果打算抽提到大片断的基因组DNA,则要尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品,可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA的样品。
不可过分干燥基因组DNA沉淀,否则会极难溶解。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 样品收集
a) 对于组织样品:
切下组织,并剪切成小块,置液氮中冻结,研碎或捣碎。
b) 对于贴壁细胞:
胰酶消化后,PBS或生理盐水洗一次,1000-2000g离心1-2分钟,弃上清,收集细胞。
c) 对于悬浮细胞:
1000-2000g离心1-2分钟,弃上清,收集细胞。
2. 基因组DNA抽提
a) 样品处理完毕后,每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K,混匀。
b) 对于上述处理好的样品,每20毫克组织或106-107个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解
液,颠倒混匀数次,充分裂解组织或细胞。
c) 50℃水浴消化过夜。
d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提样品。
e) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体),剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽
提一次。
f) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体),剩余的水相用等体积氯仿再抽提一
次。
g) 吸出约300微升上清液,加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇,颠倒数次混匀,此时可见DNA
沉淀产生。
h) 10,000g 离心1分钟,弃上清。加入70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。
i) 尽量吸除残余的乙醇,待看不到明显的液体时,立即加入50-100微升Nuclease Free Water溶解
DNA。注意:不可过分干燥基因组DNA沉淀,否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解,可以
在4℃用摇床缓慢摇动过夜,以溶解DNA沉淀。
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