碧云天的MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统 (MiniProGel? Protein Gel-Cast and Electrophoresis System)是新一代的小型垂直蛋白制胶与电泳系统,是实验室最常用、快速、便捷的蛋白电泳设备,主要用于蛋白或长度小于1kb或1000nt的核酸的变性和非变性聚丙烯酰胺电泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)、Western、Northern、EMSA等检测。200V恒压电泳35-45分钟即可完成4块(E6001)或2块(E6005)凝胶的常规SDS-PAGE电泳。
本系统的模具采用进口超高硬度特种钢材打造,电泳槽使用高端PC材料模压成型,经久耐用、美观漂亮。
本系统的制胶系统操作简单,并采用了有效的防漏技术,确保制胶过程简单便捷。
本系统既可用于手工配制凝胶的电泳,也可兼容常见小型预制胶(precast gel)的电泳,电泳槽一次可进行1-4块(E6001)或1-2块(E6005)凝胶的电泳。
本系统的电泳槽兼容碧云天的MiniBlot?蛋白转膜系统(E6050)和MiniBlot?蛋白转膜转移芯(E6053)。
本系统兼容伯乐(Bio-Rad)公司的Mini-PROTEAN®Tetra Cell及其配件。
本系统的制胶系统包含制胶架、玻璃板、夹胶框和电泳梳。手工配制凝胶非常便捷;配制凝胶用的密封垫表面平整,可有效防止胶液渗漏;本产品标配1.0mm的MiniProGel?厚玻璃板和15孔的MiniProGel?电泳梳,可选配厚度不同的厚玻璃板和电泳梳,满足不同上样需求。
本系统的主要参数参见下表:
指标 | E6001 (4胶) | E6005 (2胶) |
配制凝胶数量 | 1-4块胶 | 1-2块胶 |
凝胶配制方式 | 使用制胶架,无须封胶 | 使用制胶架,无须封胶 |
使用凝胶类型 | 手工配制凝胶或预制胶 | 手工配制凝胶或预制胶 |
电泳凝胶数量 | 1-4块胶 | 1-2块胶 |
玻璃板类型 | 厚玻璃板(带固定边条的玻璃板) 和短玻璃板 | 厚玻璃板(带固定边条的玻璃板) 和短玻璃板 |
厚玻璃板尺寸 | 10.1×8.2cm(长×宽) | 10.1×8.2cm(长×宽) |
短玻璃板尺寸 | 10.1×7.3cm(长×宽) | 10.1×7.3cm(长×宽) |
配制凝胶尺寸 | 8.3×7.3cm(长×宽) | 8.3×7.3cm(长×宽) |
适用预制胶的胶板尺寸 | 约10×8cm(长×宽)的预制胶 | 约10×8cm(长×宽)的预制胶 |
每个内槽电泳液体积 | 约160ml | 约160ml |
2块胶电泳液总体积 | 约700ml | 约700ml |
4块胶电泳液总体积 | 约1000ml | - |
SDS-PAGE凝胶电泳时间 | 35-45分钟(恒压200V) | 35-45分钟(恒压200V) |
电泳槽尺寸 | 17×12.7×14.3cm(长×宽×高) | 17×12.7×14.3cm(长×宽×高) |
加盖后电泳槽尺寸 | 18×14×18cm(长×宽×高) | 18×14×18cm(长×宽×高) |
重量 | ~1.0kg(不含包装)、~2.0kg(含包装) | ~1.0kg(不含包装)、~2.0kg(含包装) |
电压、功率限制 | 600V、500W | 600V、500W |
电泳梳参数及各种电泳梳的每孔最大上样量参见下表:
孔数 | 每孔宽度 | 0.75mm厚每孔上样量 | 1mm厚每孔上样量 | 1.5mm厚每孔上样量 |
10孔 | 5.08mm | 33μl | 44μl | 66μl |
15孔 | 3.35mm | 20μl | 26μl | 40μl |
本系统的各主要部件的介绍见下表:
部件名称 | 英文名称 | 部件介绍 |
厚玻璃板 | Spacer plate | 较厚并带有固定边条的玻璃板。边条的厚度有0.75mm、1.0mm和1.5mm三种,厚度在玻璃板上有标记以便于区分。边条的厚度对应于配制凝胶的厚度。 |
短玻璃板 | Short plate | 是较短的玻璃板,与厚玻璃板组合成凝胶三明治夹用于凝胶的配制。 |
电泳梳 | Comb | 用于凝胶配制时最后制作上样孔,有0.75mm、1.0mm、1.5mm三种厚度和10孔、15孔两种孔数,厚度和孔数在电泳梳上有标记以便于区分。本电泳梳不会影响凝胶的聚合反应,制胶过程中有内置的脊来避免空气的接触,保证均一的凝胶聚合。 |
上样托架 | Sample loading guide | 用于在上样时防止遗漏上样或重复上样。 |
夹胶框(绿色) | Casting frame | 凝胶配制前使厚玻璃板和短玻璃板对齐并确保其组成凝胶三明治夹。凸轮卡锁结构便于操作,非常容易精确对齐玻璃板;改进的设计可有效避免凸轮的脱落和松动。 |
凝胶夹组件 | Gel cassette assembly | 由一个夹胶框、一块厚玻璃板和一块短玻璃板组成。 |
制胶架 | Gel-Cast stand | 可同时配制两块凝胶,具有弹簧杠杆设计,密封垫密封性能良好,保证凝胶夹组件在凝胶配制过程中胶液不会渗漏。 |
凝胶三明治 | Gel cassette sandwich | 厚玻璃板、短玻璃板以及其中的凝胶组成所谓的凝胶三明治。 |
缓冲液挡板 | Buffer dam | 透明模具成形挡板,在进行1或3块凝胶电泳时使用。 |
电极芯组件 | Electrode assembly | 用于电泳时放置并固定凝胶三明治,并提供绿色U型密封圈以及上、下电极和电极连接插头。正极(下电极)以红色表示,负极(上电极)以黑色表示。电极芯组件组装简单便捷,可以有效防止电泳液渗漏。 |
共用电极芯组件* | Companion assembly | 用于一次性进行3块或4块凝胶电泳的必备组件,可固定凝胶三明治,并提供绿色U型密封圈以及上、下电极。 |
电泳槽与电泳槽上盖 | Buffer tank & Tank lid | 电泳槽,也称缓冲液槽,与电泳槽上盖在电泳过程中完全闭合以确保电泳正常进行,上盖打开即切断电路。电泳槽透明度高,可清晰观察电泳进行状态。 |
剥胶铲 | Gel releaser | 专为电泳后取出凝胶设计,确保不破坏凝胶和玻璃板。 |
* E6005 MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统(2胶)不包含共用电极芯组件。
本系统的制胶系统包含制胶架(2个)、夹胶框(4个)、厚玻璃板(标配1.0mm, 5块)、短玻璃板(5块)、电泳梳(标配1.0mm,15-well, 5个);本产品的电泳系统包含电泳槽(缓冲液槽)、电泳槽上盖(带电缆线)、电极芯组件、共用电极芯组件(仅E6001包含本组件)、缓冲液挡板、胶铲(2个)、上样托架(标配15-well)。本产品的电泳槽组装图见图1。
图1. MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统的电泳槽组装图。仅E6001包含共用电极芯组件。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
E6005-1 | 电泳槽(缓冲液槽) | 1个 |
E6005-2 | 电泳槽上盖(带电缆线) | 1个 |
E6005-3 | 电极芯组件 | 1个 |
E6005-4 | 缓冲液挡板 | 1个 |
E6005-5 | 制胶架 | 1个 |
E6005-6 | 夹胶框 | 2个 |
E6005-7 | 厚玻璃板(标配1.0mm) | 5块 |
E6005-8 | 短玻璃板 | 5块 |
E6005-9 | 电泳梳(标配1.0mm,15-well) | 5个 |
E6005-10 | 上样托架(标配15-well) | 1个 |
E6005-11 | 胶铲 | 2个 |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
常温保存。
注意事项:
MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统的电源须由专用的外接直流电压电源提供。推荐使用碧云天的BeyoPower?中电流电源(300V/600mA/100W) (E6080)或BeyoPower?高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。
本产品所允许的最大输入电压为600V (直流),最大输入功率为500W,室温不超过40℃。
使用本产品时,通过电泳槽的电流全部经过上盖接入,当上盖被打开时接入电泳槽的电流即被切断。为确保安全,一定要使用电泳槽上盖,不要尝试在没有上盖的情况下使用电泳槽。使用结束后,确保在关闭电源后打开或移走上盖。
本产品从设计到生产均满足相关的安全标准,严格按照使用说明的操作将是安全的。本产品严禁以任何方式、方法进行修改或改进,对本产品的修改或改进会造成质保失效、安全标准的破坏和潜在的安全隐患。人为故意、未经许可对本产品进行修改或改进、或未按照产品说明书进行操作,所造成的损害和损失,责任自负。
本产品所有组件均不可以接触纯的或高浓度的丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、苯酚、TEMED、二甲苯等有机溶剂。使用有机试剂造成的损坏均不在保修范围之内。本产品可以耐受20%的甲醇或乙醇。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 夹胶框、制胶架的组装
1) 将夹胶框垂直放置在水平桌面上,并使夹胶框门处于开放状态。
2) 按照所需凝胶厚度选择合适的带边条的厚玻璃板,将短玻璃板放置其上(图2A)。注意:所有玻璃板必须洁净、干燥。
3) 使带边条厚玻璃板的箭头标记端向上,将两块玻璃板滑入夹胶框,使短玻璃板一面朝向前方(图2B)。
注意:确认两块玻璃板平齐处于水平平面上,并且箭头标记方向正确。玻璃板方向错误或者未对齐会造成漏胶。
4) 玻璃板到位后关合夹胶框门,将玻璃板夹紧在夹胶框中(图2C)。检查玻璃板底部是否平齐。
5) 保持夹胶框门朝外,将夹胶框放置于制胶架的灰色灌胶密封垫上。同时将弹簧杠杆压在带边条的玻璃板上(图2D)。
6) 重复本步骤的1-5可组装另一块夹胶框。
图2. 夹胶框、制胶架的组装
2. 凝胶配制
1) 将梳子完全放入组合好的夹胶框中,在梳齿下端1或1.5厘米处作标记,此标记为分离胶高度(标记好高度后取出梳子);或者根据分离胶和浓缩胶的推荐用量直接配制。推荐使用碧云天的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)或SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 (P0012AC)。
2) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下表配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)和浓缩胶(即上层胶)。
注意:TEMED可以催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺的聚合,所以建议最后再加入过硫酸铵和TEMED。
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围:
SDS-PAGE分离胶浓度 | 最佳分离范围 |
6%胶 | 50-150kD |
8%胶 | 30-90kD |
10%胶 | 20-80kD |
12%胶 | 12-60kD |
15%胶 | 10-40kD |
配制一块凝胶所用全部溶液体积(该体积须根据有无电泳梳、有无浓缩胶而调整)
凝胶厚度 | 体积 |
0.75mm | 4.2ml |
1.0mm | 5.6ml |
1.5mm | 8.4ml |
注:对于浓缩胶,10ml溶液足够配制任何凝胶厚度的2块浓缩胶。
不同浓度SDS-PAGE分离胶(也称下层胶)的配制表:
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
6%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 | 20.0 |
30%Acr-Bis (29:1) | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 6.0 | 10.0 |
1M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.004 | 0.008 | 0.012 | 0.016 | 0.024 | 0.04 |
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
8%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 1.7 | 3.3 | 5.0 | 6.7 | 10.0 | 16.7 |
30%Acr-Bis (29:1) | 1.3 | 2.7 | 4.0 | 5.3 | 8.0 | 13.3 |
1M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.003 | 0.006 | 0.009 | 0.012 | 0.018 | 0.03 |
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
10%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 1.3 | 2.7 | 4.0 | 5.3 | 8.0 | 13.3 |
30%Acr-Bis (29:1) | 1.7 | 3.3 | 5.0 | 6.7 | 10.0 | 16.7 |
1M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.012 | 0.02 |
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
12%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 6.0 | 10.0 |
30%Acr-Bis (29:1) | 2.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 | 20.0 |
1M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.012 | 0.02 |
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
15%胶 | 5 | 10 | 15 | 20 | 30 | 50 |
蒸馏水 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 3.0 | 5.0 |
30%Acr-Bis (29:1) | 2.5 | 5.0 | 7.5 | 10.0 | 15.0 | 25.0 |
1M Tris, pH8.8 | 1.9 | 3.8 | 5.7 | 7.6 | 11.4 | 19.0 |
10% SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
10%过硫酸铵 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.3 | 0.5 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.012 | 0.02 |
SDS-PAGE浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)的配制:
成分 | 配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升) | |||||
5%胶 | 2 | 3 | 4 | 6 | 8 | 10 |
蒸馏水 | 1.4 | 2.1 | 2.7 | 4.1 | 5.5 | 6.8 |
30%Acr-Bis (29:1) | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 1.0 | 1.3 | 1.7 |
1M Tris, pH6.8 | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.25 |
10% SDS | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
10%过硫酸铵 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
TEMED | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |
3) 在分离胶中加入10%过硫酸铵和TEMED,混合均匀,用移液管或加样枪将分离胶注入玻璃板之间至标记处。注入分离胶时须平稳以防止其与空气混合。
4) 立即从左到右均匀分配1ml去离子水覆盖分离胶表面。注意:覆盖时须小心缓慢平稳加入以防去离子水与分离胶混合。
5) 放置30分钟-1小时使凝胶聚合,此时可以看到明显的分界线。倒掉去离子水水,用滤纸使分离胶表面适当干燥。
6) 在浓缩胶中加入10%过硫酸铵和TEMED,混合均匀,用移液管或加样枪将浓缩胶注入玻璃板之间直至与短玻璃板平齐。
7) 从上部插入合适的电泳梳,确认电泳梳两端突起在边条之间。完全插入直至电泳梳背脊与短玻璃板对齐。
8) 放置30-45分钟使浓缩胶聚合,该凝胶三明治(简称凝胶板)即可用于电泳。
9) 用蒸馏水或去离子水清洗用过的夹胶框、制胶架。
注:也可直接使用碧云天的各类预制胶产品。
3. 电泳槽的组装
注:以下以E6001 MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统(4胶)为例,一次最多可以电泳4块凝胶;E6005 MiniProGel?蛋白制胶与电泳系统(2胶)不含共用电极芯组件,一次最多可以电泳2块凝胶。
所需材料:MiniProGel?电泳槽、电极芯组件(一次性电泳1-2块胶仅需使用有电极插头的电极芯组件,一次性电泳3-4块胶另需使用无电极插头的共用电极芯组件)、凝胶三明治或预制胶(简称凝胶板)、电泳缓冲液(1-2块凝胶共需700毫升;3-4块凝胶共需1000毫升)、电源。
电泳槽的组装:
1) 将电极芯夹子呈打开方式放置于干净平整桌面上(图3A)。
2) 将第一块凝胶板以短玻璃板向内方式放置于电极芯组件的凝胶板支撑架上,凝胶板支撑架位于电极芯组件底部且每侧均有两个。此时凝胶板相对中心有30度的夹角。放置第一块凝胶板时须小心确认电极芯夹子保持平衡状态不会翻倒。在另一侧的凝胶板支撑架上放置第二块凝胶板。此时共有两块凝胶板每侧一块,相对中心倾斜(图3B)。
注:凝胶板必须以短玻璃板向内方式放置于电极芯夹子两侧。同时,电极芯夹子需要2块凝胶板组合形成功能组件。如果是奇数胶(1或3块凝胶板)的电泳,则必须使用缓冲液挡板(图3B),使用缓冲液挡板注意挡板的方向。
3) 用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色U型密封圈,确保短玻璃板正在绿色U型密封圈上端的凹槽之下。
注:对于碧云天的各类预制胶,请参考预制胶说明书,将具有突起结构的绿色U型密封圈取出后反过来安装,使其没有突起的平滑面朝外,从而防止漏液。
图3. MiniProGel?电泳槽的组装。
4) 一
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