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Blood PCR Enhancer (2X) 2ml

价:
75.00
价:
¥75.00

号:D7245

牌:碧云天Beyotime

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碧云天研发的Blood PCR Enhancer (2X),即耐血PCR增强剂(2X),是一种使用碧云天的D7241 HemoTaq? DNA Polymerase (Blood-resistant)D7243 HemoTaq? HF DNA Polymerase (Blood-resistant)时,克服因模板高GC含量所导致的PCR扩增障碍的PCR增强剂。高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点,本产品可用于含有肝素、柠檬酸钠以及EDTA等抗凝血的直接PCR反应,从而大大提高了高GC含量DNA模板的扩增效率及扩增的特异性。本产品也可以用于普通PCR时扩增高GC含量的目的片段。
Blood PCR Enhancer (2X)可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶,如碧云天的D7241 HemoTaq? DNA Polymerase (Blood-resistant)D7243 HemoTaq? HF DNA Polymerase (Blood-resistant),NEB的Hemo KlenTaq等。
本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果参考图1。
图1.使用Blood PCR Enhancer (2X)扩增高GC含量目的基因的电泳效果图。图A中可见,HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%),在添加Blood PCR Enhancer (2X)后可以扩增出单一的非常明亮的特异性条带,但不添加时就不能扩增获得特异性的目的条带。图B中可见,扩增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)时,使用碧云天生产的本产品能扩增出单一的条带,而使用公司A和B的类似产品主带比较微弱并且杂带很多,使用常见的最终浓度为1.3M的甜菜碱(Betaine)的扩增高GC含量的该片段时效果也欠佳。
本产品如果用于50微升的PCR反应体系,足够用于80个反应;如果用于20微升的PCR反应体系,足够用于200个反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7245 Blood PCR Enhancer (2X) 2ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
在使用本产品Blood PCR Enhancer (2X)的同时,必须同时使用和耐血DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的PCR Buffer。
本产品溶解时如果有结晶状沉淀物,可以在50℃水浴温育片刻促进溶解,并确保完全溶解后使用。
请尽量使用新近采集的抗凝血样本进行检测;如果是冻存的样本,尽量避免反复冻融,以免在冻融过程中导致目的基因的断裂和降解。
设置PCR反应体系时,抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5-10%左右,可以直接添加到PCR体系中,无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后,建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片,便于吸取上清用于电泳分析等。注意:由于抗凝血本身的原因,PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。
由于PCR反应非常灵敏,可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.PCR反应参数的设置请参照特定的耐血DNA聚合酶的说明书进行。通常对于扩增高GC含量的DNA模板,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
2.PCR反应体系的设置可以参考特定的耐血DNA聚合酶进行,仅仅添加反应总体积一半的本试剂盒所提供的Blood PCR Enhancer (2X)即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:
a.融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将HemoTaq? DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
b.参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应,可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和HemoTaq?酶的混合物,然后分装到各PCR反应管内。根据情况,有时混合物中也可以包括引物):

试剂 20μl体系 50μl体系 终浓度
Nuclease-Free Water (4-x)μl (10-y)μl -
10X HemoTaq? PCR Buffer 2μl 5μl 1X
Blood PCR Enhancer (2X) 10µl 25µl 1X
dNTP (2.5mM each) 2μl 5μl 0.25mM each
引物混合物(10μM each) 1μl 2.5μl 0.5μM each
HemoTaq? DNA Polymerase 1μl 2.5μl -
抗凝全血 xμl yμl -
总体积 20μl 50μl

注意:
(a)模板使用量:作为PCR模板的抗凝血用量一般为PCR反应体系总体积的1-20%,建议起始使用量为5%。如果PCR反应用于检测基因组的DNA片段,可以适当减少抗凝血用量;如果用于检测血液样品中某种病毒或细菌等微生物的目的DNA片段,建议使用50μl的PCR体系,并使用较大的模板血量。对于高GC含量的PCR扩增,可以使用扩增高GC含量DNA片段的D7245 Blood PCR Enhancer (2X),或者尝试向PCR体系中加入终浓度1-10% (体积百分比)的DMSO。
(b)引物浓度:通常引物的终浓度为0.5μM时可获得良好的检测效果,也可以根据情况在0.1-1.0μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度。
c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。
d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油(ST275 Mineral oil (矿物油))。
e.把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上,开始PCR反应。PCR反应参数的设置可以参考该耐血DNA聚合酶的常规参数,同时可以考虑适当延长延伸时间。

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