• 分 子 式:
• 分 子 量:
• 外      观:
• 别      名:
• 纯      度:
• 储存条件: 0-5 ℃
• 运输条件: 室温

I 、概述

铁是生物体内最丰富的过渡金属元素，它参与各种生理过程活动。 近年来，活细胞中的游离铁受到广泛关注。 游离铁最常以其稳定的氧化还原态存在，即亚铁离子（Fe²⁺）和铁离子（Fe³⁺）。对研究者来说，在研究细胞内的还原环境，金属转运蛋白和Fe²⁺的水溶性时，了解Fe²⁺的行为比了解Fe³⁺的行为更为重要。FerroOrange作为一种新型的荧光探针，可对活细胞内的Fe²⁺进行荧光成像。

     FerroOrange荧光谱图           FerroOrange与金属离子的选择性

                                                                     Bpy：2,2'-Bipyridyl

   II 、试剂盒内含

1 sample：

FerroOrange·····24 µg ×1 管

3 samples：

FerroOrange·····24 µg ×3 管

III 、注意事项

1.本试剂盒中的试剂，请恢复至室温再使用。

2.由于在运输过程中可能会因振动而使试剂粘附在管壁或管盖内侧，因此在打开前，请将试剂敲落至管底部。

3.加入FerroOrange染色剂后请立即观察，不要洗涤。

IV 、操作步骤

1.细胞接种于荧光培养皿中，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

2.去除上清液，并用HBSS或无血清培养基洗涤细胞3次。

3.更换含有药物的培养基，在37℃，5% CO₂培养箱中培养。

 *请根据药物特性优化培养时间。

4.加入浓度为1 μmol/L的FerroOrange工作液，在37℃，5% CO₂培养箱中培养。

 *加入FerroOrange染色剂后请立即观察，不要洗涤。

5.在荧光显微镜下观察细胞。

                                                      FerroOrange检测细胞内Fe²⁺

V 、实验例

用FerroOrange检测HeLa细胞中的Fe2+。

1.将HeLa细胞接种在μ-Slide 8 well plate (ibidi)中，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

2.用无血清培养基洗涤3次后加入新鲜的无血清培养基

3.将硫酸亚铁铵（II）（ddH₂O配置,浓度10 mmol/L）加入细胞中，终浓度：100 μmol/L。

4. 在37℃，5% CO₂培养箱中培养30min后，HBSS洗涤3次。

5.将含有FerroOrange（1μmol/ L）和2,2'-联吡啶（Bpy）（100 μmol/ L）的HBSS溶液加入细胞中，37℃，5% CO₂培养箱中孵育30min。

6.在荧光共聚焦显微镜下观察细胞。

                     FerroOrange检测细胞内Fe²⁺

Ex / Em = 561 nm / 570-620 nm                            &nbs