间充质干细胞无血清培养基

MSC NutriStem^® XF Medium

产品说明书：

一、目的：利用间充质干细胞无血清培养基培养分离脐带间充质干细胞。

二、材料：新生儿脐带

三、主要仪器：医用手术器械，生物安全柜，CO₂培养箱，6孔培养板，T25培养瓶

四、试剂：

表1 MSC NutriStem^® XF Medium

用途	品牌	货号	名称	规格	保存条件
MSC培养基	Biological Industries	05-200-1A	MSC NutriStem® XF Basal Medium MSC无血清基础培养基	500ml	4℃
	Biological Industries	05-201-1U	MSC NutriStem® XF Supplement MSC无血清添加剂	3ml	-20℃
细胞贴壁	Biological Industries	05-752-1H	MSC Attachment solution (100X) MSC贴壁试剂	1 ml	4℃
	Biological Industries	05-760-1-15	NutriCoat™ Attachment solution (500X)  NutriCoat™贴壁试剂	1.5ml	RT
	Biological Industries	PLTGOLD010R	PLTGold® Human Platelet Lysate 血小板裂解物**	10ml	-20℃
	**已知血小板裂解物含有大量的外泌体，用户可依照实验目的选用合适的贴壁试剂。
细胞传代	Biological Industries	03-079-1A	Recombinant Trypsin-EDTA Solution 重组胰酶-EDTA	500ml	RT
	Biological Industries	03-048-1C	Soybean Trypsin Inhibitor (50X) 大豆胰酶抑制剂	20 ml	-20℃
	Biological Industries	02-023-1A	DPBS (w/o Ca & Mg)	500 ml	RT
			DPBS缓冲液
辅助试剂	Biological Industries	05-713-1B	NutriFreez®  D10 Cryopreservation Medium	100 ml	4℃
			D10 冻存液
	Biological Industries	03-031-1B	Penicillin-Streptomycin Solution (100X)青链双抗	100ml	-20℃
	Vivacell	C35010010	MSC ACF Tissue Digestive Mix 高效原代干细胞分离液	100m	-20℃

五、实验前准备：

5.1完全培养基的准备

5.1.1冻存的MSC NutriStem^® XF Supplement在室温或2-8℃解冻，避免反复冻融。

5.1.2配制：MSC NutriStem^® XF Basal Medium（培养基）：MSC NutriStem^® XF Supplement（添加物）：青链双抗=500ml：3ml：5ml，4℃保存，2周内使用。

注1：双抗非必须，建议原代（P0）时使用。

注2：培养基含L-Glutamine，贮藏时避免长期照光。

 

5.2包被培养皿

或跳过此步骤，直接加2%血小板裂解物，促进MSC细胞贴壁与生长。

如果使用05-752-1H，参考如下步骤：

5.2.1使用DPBS溶液（BI, Cat# 02-023-1A），将MSC贴壁试剂稀释100倍（1:100）。

5.2.2参照表3，加入适量的1X MSC贴壁试剂涂层培养皿或板。

表3  涂层过程中贴壁试剂建议使用量（05-752-1）

培养器皿	表面积cm2/孔或瓶	1X MSC贴壁试剂使用体积
96孔板	0.34	0.05~0.1 ml
24孔板	1.9	0.2~0.4 ml
12孔板	3.9	0.4~0.8 ml
6孔板/ 35 cm培养皿	9.6	1~2 ml
T25瓶/ 60 cm培养皿	25	2.5~5 ml
T75瓶	75	7.5~15 ml

注1：涂层的培养皿需在无菌条件下2℃-8℃储存，需在一周内使用。（标示红色为原厂建议使用量，经过实验测试后可减半使用）

注2：包被期间， 注意包被液不可以干掉！

5.2.3轻轻摇动培养皿，确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后，用封口膜包裹涂层的培养皿。

5.2.4在2-8℃孵育过夜；或者在CO₂培养箱，37℃，至少孵育30分钟。

5.2.5接种前, 吸除贴壁试剂，再用DPBS轻轻冲洗培养皿，即可接种细胞。

如果使用05-760-1-15，参考如下步骤：

5.2.1使用生理盐水，将NutriCoat™ 促贴壁试剂稀释500倍（1:500）。

5.2.2参照表4，加入适量的1X NutriCoat™ 促贴壁试剂涂层培养皿或板。

表4  涂层过程中贴壁试剂建议使用量（05-760-1-15）

培养器皿	表面积cm2/孔或瓶	1X NutriCoat™ 促贴壁试剂使用体积
96孔板	0.34	0.1 ml
24孔板	1.9	0.5 ml
12孔板	3.9	1 ml
6孔板	9.6	2.5 ml
T25瓶	25	6.5 ml
T75瓶	75	19 ml

注1：涂层的培养皿需在无菌条件下2℃-8℃储存，需在一周内使用。

注2：包被期间，注意包被液不可以干掉！

5.2.3轻轻摇动培养皿，确认贴壁试剂均匀分布在培养皿表面后，用封口膜包裹涂层的培养皿。

5.2.4在2-8℃孵育过夜；或者在CO₂培养箱，37℃，至少孵育1小时。

5.2.5接种前, 吸除贴壁试剂，用DPBS轻轻冲洗培养皿（或不需要清洗），即可接种细胞。

5.3制备1X大豆胰酶抑制剂