说明书：

MF159-M5 EASYspin Plus 动物骨组织RNA快速提取试剂盒.pdf

【产品简介】

骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA难以分离，无法用传统Trizol法进行高质量提取。本试剂盒采用独有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖。同时独特基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶， 离心沉淀去除多糖和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清除柱，然后RNA被选择性洗脱滤过， 吸附在基因组DNA清除柱上的残留DNA无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

 

 

【产品特色】

1. 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

 

2. 简捷，单个样品操作一般可在35分钟内完成，最简单快速的试剂盒。

 

3. 独家研发成功基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

 

4. 适应性广泛，可以提取各种骨组织包括矿化骨组织。

 

5. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot，二代测序和各种实验。

 

 

【产品组份】

          50T                             注意事项

裂解液CLB                                 50 ml           室温密闭干燥保存

PLANTaid                                   5 ml            室温保存

裂解液 RLT plus                             25 ml          室温密闭干燥保存

去蛋白液RW1                              40 ml           室温密闭干燥保存

漂洗液RW                                 10ml           初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇

RNase-Free H₂O                            10ml           室温密闭干燥保存

基因组DNA清除套管                        50套          室温密闭干燥保存

RNase-Free吸附套管(RA)                    50套          室温密闭干燥保存

 

 

【注意事项】

1. 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

 

2. 需要自备乙醇，研钵或者其它合适的破碎骨组织装置。

 

3. 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

 

4. 裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

 

5. 关于DNA 的微量残留:

 

一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

 

1)       选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

 

2)       选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

 

3)  将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup) ，请联系我们索取具体操作说明书。

 

4)     在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。

详见产品说明书：

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