产品简介：

Hoechst染料是一类在显微观察中标记DNA的荧光染料。因为这类荧光染料能标记DNA，所以它们也经常用于细胞核和线粒体的显像观察。这类染料中有两个相关的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342经常使用。这两种染料都在紫外光下350nm处被激发，都在461nm处最大发射光附近发射蓝/青色荧光。Hoechst染料可以用于活细胞或者固定化细胞，并且经常用来代替其它核酸染料如DAPI。这两种染料关键的不同点在于，Hoechst 33342加有乙基，这使它具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜。而且有些种类的细胞由于可以更有效地将进入细胞的Hoechst染料主动转运到细胞外，因此在一些实验中，Hoechst 33258的渗透性明显比Hoechst 33342要弱些。这些染料也可以用来检测样品中的DNA含量，通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线。

Hoechst 33258是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

使用方法（适用于大多数细胞）：

一．对于固定的细胞或组织：

1．对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。

2．对于贴壁细胞或组织切片，可以在盖玻片上或细胞培养板中原位染色，加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，并混匀。室温放置3-5分钟。

3．吸除Hoechst 33258染色液，用TBST 、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

4．直接在荧光显微镜下或封片后荧光显微镜下观察。观察细胞凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

二．对于活细胞或组织：

1．加入适当量Hoechst 33258染色液，必须充分覆盖待染色的样品，通常对于6孔板，一个孔需加入1ml 染色液，对于96 孔板每一个孔需加入100ul染色液。

2．在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项：

1、  荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

2、  Hoechst 33258对人体有一定刺激性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存，有效期2年。