Product Brief

Instructions

工作原理

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

使用客户

用户自备试剂：
1．粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。
2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠8.5g, Na2HPO4 2.8g,NaH2PO4 0.4g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
3．0.01M 枸橼酸盐缓冲液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g, 枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。

免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A 程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B 程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C 程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D 程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。
A.石蜡切片热修复抗原染色程序:
1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片紧密粘附。
2. 切片常规脱蜡至水。
3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。
4. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。
5. 滴加5%BSA 封闭液,室温20 分钟。甩去多余液体, 不洗。
6. 滴加适当稀释的一抗（小鼠IgG），20-37 ℃ 1~2 小时左右。也可4℃过夜。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗2 分钟×3 次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
7. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG,20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗2分钟×3 次。
8. 滴加试剂SABC-AP,20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗5 分钟×4 次。
9. 显色:BCIP/NBT用0.01M TBS（pH9.0-9.5）按1：20的比例稀释，混匀后加至切片。20-37℃显色10-30分钟，镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
10. 核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片（水溶性封片剂应加温至60℃左右）。显微镜观察。
B. 石蜡切片酶消化程序:
以下面的步骤代替A 程序中的第4 步:滴加复合消化液(博士德有售)5-10 分钟。蒸馏水洗3 次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C. 石蜡切片不消化/不修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A 程序中的第4 步即可。
D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序
1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30 分钟。
3. 30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。其余步骤和石蜡切片5-10 步相同。如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10 步相同。
注意事项：
1. 如果染色背景过高，在SABC 反应之后，BCIP/NBT显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20 的PBS洗涤切片4 次，单纯PBS 洗2 次，然后DAB 显色。
2. 热修复抗原可选0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS 等多种缓冲液。