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| 产品特点： | 1.兼容性好，获得的样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析。 2. 可在90分钟内完成蛋白的提取。 3. 操作简单，无需超速梯度离心。 4. 一般情况下，胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染在10%左右，基因组DNA/mRNA的干扰均降到了最低。 5.胞核蛋白一旦经过脱盐或稀释，即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和pull-down实验。 |
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注意事项：
1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2.对于组织样品，本试剂盒比较适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果不是很理想。
3.建议使用BCA蛋白定量试剂盒测蛋白浓度。
4.如果需要更浓缩的核提取物，提取中使用的胞核蛋白提取试剂的体积可以降低2到4倍，而不会对蛋白质回收产生不利影响。
5.如果在随后的应用中需要大量的核提取物，或者如果下游实验出现问题，请在使用前透析核提取物以去除多余的盐。
6.使用蛋白酶抑制剂来保持提取物的完整性和功能。
需要材料：
蛋白酶或磷酸酶抑制剂
2ml的离心管
涡旋仪
达到16000g的离心机
组织匀浆器
PBS: 0.1M 磷酸钠, 0.15M NaCl，pH 7.2
使用方法：
溶液准备：取出胞浆蛋白提取试剂和胞核蛋白提取试剂置于冰上，使用前根据需要加入酶抑制剂。
细胞样品：
1. 对于贴壁细胞:细胞刮刮下细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
2. 对于悬浮细胞:600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
3.加入适量的预冷的PBS重悬细胞, 600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4.按照下表加入各试剂的量
细胞湿体积（μl） | 胞浆蛋白提取试剂A（μl） | 胞浆蛋白提取试剂B（μl） | 胞核蛋白提取试剂（μl） |
10 | 100 | 5 | 50 |
20 | 200 | 10 | 100 |
50 | 500 | 25.5 | 250 |
100 | 1000 | 50 | 500 |
5. 加入胞浆蛋白提取试剂A，振荡混匀数秒，使细胞完全悬浮并分散开，放置在冰上孵育10-15分钟。
6. 加入胞浆蛋白提取试剂B,振荡混匀5 秒，冰上孵育1分钟。(注意：若胞核蛋白中掺杂胞浆蛋白，可适当延长此步骤的孵育时间，一般可以延长1-5分钟。）
7．振荡混匀5秒，16000g 离心5分钟。
8．立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白，上清至于冰上保存用与后续实验或与-80℃保存，用于后续的分析。
9．加入胞核蛋白提取试剂，振荡混匀数秒，使沉淀完全悬浮并分散开，放回冰浴中孵育40分钟，期间每隔10分钟拿出来振荡混匀15秒， 16000g 离心5分钟。
10．立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白，将分离的胞核蛋白溶液至于冰上保存用与后续实验或与-80℃保存，用于后续的分析。
组织样品：
1.手术切除组织块，迅速置于预冷的PBS中，漂洗数次，滤纸吸干水分，将组织切成细小的组织块，称重取组织，按照下表加入各试剂的量
组织重量（mg） | 胞浆蛋白提取试剂A（μl） | 胞浆蛋白提取试剂B（μl） | 胞核蛋白提取试剂（μl） |
20 | 200 | 10 | 100 |
40 | 400 | 20 | 200 |
80 | 800 | 40 | 400 |
100 | 1000 | 50 | 500 |
2.加入胞浆蛋白提取试剂A，在匀浆器中匀浆，在冰上操作，直至获得均匀的悬浮液，匀浆后把匀浆液转移到预冷的塑料离心管内，冰浴放置10分钟。
3. 加入胞浆蛋白提取试剂B,振荡混匀5 秒，冰上孵育1分钟。
4.振荡混匀5秒，16000g 离心5分钟。
5.立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白，上清至于冰上保存用与后续实验或与-80℃保存，用于后续的分析。
6.加入胞核蛋白提取试剂，振荡混匀数秒，使沉淀完全悬浮并分散开，放回冰浴中孵育40分钟，期间每隔10分钟拿出来振荡混匀15秒，16000g 离心5分钟。
7.立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白，将分离的胞核蛋白溶液至于冰上保存用与后续实验或与-80℃保存，用于后续的分析。
注意：对于某些组织，若胞浆胞核蛋白提取不理想，可以按照如下操作来进行，按照20:1的比例混合胞浆蛋白提取试剂A和B(例如200μl胞浆蛋白提取试剂A中加入10μl胞核蛋白提取试剂B)，此为组织匀浆液，然后按照1:10比例混合组织和组织匀浆液（如：20mg的组织样品，需加入200μl组织匀浆液），并在玻璃匀浆器内充分匀浆，匀浆需在冰浴或4℃进行，匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟，4℃ 1500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，此为抽提得到的部分胞浆蛋白。吸上清时千万不要触及沉淀，沉淀中还有很多细胞还没有破碎，接下去按照细胞样品的操作步骤4开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤10抽提得到胞浆蛋白和胞核蛋白，两次分离得到的胞浆蛋白可以合并。
结果实例1：
采集不同的小鼠组织（100mg），用PBS漂洗后采用本试剂盒进行裂解，使用博士德BCA蛋白质定量试剂盒测定提取物浓度。
结果实例2：
选用不同的小鼠组织，用本试剂盒提取的蛋白作做免疫印迹实验，上图为GAPDH在胞浆和胞核的表达情况，下图为PCNA在胞浆和胞核的表达情况。
疑难解答：
问题 | 原因 | 解决方法 |
提取的胞浆蛋白量少 | 细胞没裂解完全 | 增加胞浆蛋白提取试剂的量 |
细胞没完全分散开 | 完全混匀细胞 | |
组织没充分匀浆 | 匀浆充分 | |
提取的核蛋白量少 | 细胞核沉淀没分散开 | 完全混匀细胞核沉淀 |
细胞核量少 | 增加离心时间 | |
蛋白没有活性或活性低 | 样品没低温保存 | 低温处理样品 |
样品中蛋白酶的存在 | 加入酶抑制剂 | |
胞浆胞核蛋白交叉 | 胞浆蛋白裂解时间过长 | 减少加入胞浆蛋白提取试剂A和B后的孵育时间 |
胞浆蛋白溶液没有完全吸干净 |
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