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GV3101 电击感受态细胞 0% 50ul*10

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货号：S32882-50ul*10

品牌：上海源叶

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英文名：
GV3101 Electroporation-Competent Cell

别名：

提示：详情请下载说明书。

介绍：基因型C58 (rif R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR/strepR) Nopaline简要说明GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：Strep和gent，赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。开发的GV3101电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×104cfu/μg；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40kd）检测转化效率可达5×103cfu/μg。操作说明1.0.2cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5ug质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。3.启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/ml kan 时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。注意事项1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在盐，乙醇等污染，转化效率急剧下降；若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。2.混入质粒时应轻柔操作。3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。4.利福平浓度不应高于25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan，若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低（可以忽略）。