您好！欢迎来到炼石商城请登录注册兼职小伙伴

我的购物车

Qiagen 凯杰 Biosharp Omega

客服热线 0771-3293894

首页感受态细胞上海源叶>

图片仅供参考，请以实物为准

EPI300 电击感受态细胞 0% 50ul*20

市场价：: 3600.00

促销价：: ¥3600.00

货号：S32842-50ul*20

品牌：上海源叶

配送至：

北京朝阳

支付：账期货到付款

数量：

EA (预计4-5工作日到货)

工作时间

周一至周五：9:00-18:00

咨询电话

0771-3293894

在线咨询

: 客服郭恒蔡玉坤曾宪飞技术咨询

浏览了该商品的用户最终购买

RNeasy Mini Kit (50) 50次

3720.00

10ul吸头，透明，袋装，可灭菌...

85.80

UltraSignal 超敏ECL化学发光...

686.00

浏览了该商品的用户还浏览了

QIAfilter Plasmid Maxi Kit (...

3000.00

QIAamp DNA Blood Midi Kit (2...

2680.00

QIAamp UCP Pathogen Mini Kit...

4112.00

商品介绍
商品咨询

注明：此产品需要干冰运输，需要额外加350元干冰运输费用

英文名：
EPI300 Electroporation-Competent Cell

别名：

提示：详情请下载说明书。

介绍：基因型F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ –rpsL nupG trfA dhfr.简要说明EPI300电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。EPI300细胞含有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导剂Ⅰ，ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（例如：哺乳动物基因组DNA）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。此外，EPI300电击感受态细胞转化效率极高，特别适用于文库构建，生物生产的EPI300电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。操作说明1.0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。2.取-80℃保存的EPI300电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；B.对于连接产物，大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与EPI300电击感受态混合后电击转化，无需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。C.对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，然后与EPI300电击感受态混合进行电击转化。3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。注意事项1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。6.对于连接产物转化，部分公司的连接体系或重组体系(例如：Thermo，NEB公司的T4 连接酶系统，NEB，天根的50度反应重组系统)可以直接与EPI300电击感受态混合后电击转化，无需纯化，但DNA浓度不能过高，最好不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。7.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。8.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。