来源
重组表达纯化。
反应条件
1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液(50 mM Tris-HCl,10 mM MgCl 2,10 mM DTT,1 mM ATP,(pH 7.5 @ 25℃)),25℃ 温育。
热失活
65℃ 加热 10 分钟。
质保声明
Hi-T4 耐热 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆
www.neb.com 或 www.neb-china.com。
单位定义(粘性末端活性单位)
1 单位指在 20 µl 反应体系中,25℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的 6 µg经 HindIII 消化的λDNA 连接所需的酶量。
浓度
400,000 units/ml。
注意事项
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,Hi-T4 耐热 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、若需稀释 Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,推荐使用 50% 甘油贮存缓冲液稀释(稀释缓冲液A,
NEB #B8001S),-20℃ 保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、连接温度
连接粘性末端(1 x T4 DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 DNA 连接酶,25 - 50ºC 温育 10 分钟。连接平末端或单碱基突出末端(1 x StickTogether DNA 连接酶缓冲液):在 20 µl 反应体系中加入 1 µl Hi-T4 耐热 DNA 连接酶,25 - 50ºC 温育 10 分钟。不要用加热来终止反应,因为
StickTogether DNA连接酶缓冲液里的 PEG 受热会抑制转化。
参考文献
该产品的特性和应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。