本系列试剂盒特别针对膜蛋白表达设计，能够通过质粒模板实现膜蛋白的少量表达。本系列试剂盒采用转录和翻译非偶联的方法，试剂盒中提供包含体外转录所需的酶、NTP和离子环境的Transcription PreMix LM，加入模板后先完成DNA的转录，再配合麦胚无细胞蛋白表达系统预混mix完成mRNA的翻译，该mix中包含蛋白翻译的所有必需酶类、各种tRNA和离子，另外含有特殊的脂质体，使目的蛋白能够在脂质体的生物膜上正确合成和组装。本系列试剂盒利用双层液相反应法（Bilayer）表达目的蛋白，每个反应蛋白表达量为10 µg左右，适合western blot、CBB染色等蛋白检测实验和下游膜蛋白功能解析。此外，本试剂盒还可作为模板测试试剂，检测目的质粒能否成功表达目的蛋白。能够在本试剂盒表达成功的模板质粒，可直接应用于ProteoLiposome BD Expression Kit (CFS-PLE-BD)中，做大量膜蛋白表达使用。

产品特点

针对性强：含有脂质体，特别针对传统方法难表达、难组装的膜蛋白设计

操作简单：采用Bilayer 反应方法，不需要特殊仪器，只需加入模板即可进行反应

表达高效：一天内完成蛋白表达，蛋白表达量约为10 µg

储存条件

低于-70℃保存，避免长期存放于干冰环境，反复冻融不超过2次。

实验例

建议使用质粒模板进行蛋白表达。可以使用pEU系列质粒作为表达载体，将带有起始密码子和终止密码子的cDNA克隆至载体上，提取质粒后直接用于蛋白表达。亦可使用其他带有SP6启动子的表达载体进行蛋白表达，不要使用T7启动子。

蛋白翻译采用双层液相反应法（Bilayer Reaction Method），通过反应液和麦胚裂解物造成的密度差，相互渗透，在液面相交处发生反应。随着时间的推进，溶液逐渐由两相变为单一的混合物而终止。在下层液中加入脂质体（liposomes），蛋白可直接在脂质体上合成和组装。

使用ProteoLiposome PLUS Expression Kit表达膜蛋白——G蛋白偶联受体T1R1，使用考马斯亮蓝（CBB）染色检测（PAGE图）蛋白表达量。转录时间为37℃1小时，翻译时间为15℃4小时。结果显示，翻译4小时即可观测到膜蛋白表达。延长翻译时间蛋白得率更高，翻译20小时可达到最大蛋白表达量。