EcoGII 甲基转移酶是非特异甲基转移酶,能对序列中任意腺嘌呤残基(N6)进行甲基化修饰。
重组 E. coli 菌株,该载体含有从 E. coliC227-11 克隆的 EcoGII 修饰基因。
1X CutSmart 缓冲液 + SAM [50 mM KAc,20 mM Tris-Ac,10 mM Mg(Ac)2,100 μg/ml BSA(pH 7.9 @ 25℃)],加入 160 μMSAM(随酶提供),37℃ 温育。
1 单位指在 20 μl 反应体系中,37℃ 条件下,30 分钟能保护 100 ng FAM 标记 dsDNA 不被MboI 限制性内切酶切割所需要的酶量。
5,000 units/ml
SAM 在 37℃(pH 7.5)条件下不稳定,温育超过 4 个小时需要补充新的 SAM。甲基化反应中,SAM 以 1:200 的比例稀释到终浓度为 160μM。EcoGII 甲基转移酶对盐敏感。确保 DNA 溶液的盐浓度很低或者确保总反应体系中 DNA 溶液仅占很低的比例。
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