RT-PCR用cDNA的合成
本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-),与以往的RTase相比,可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。
●高效率
使用高效率逆转录酶「ReverTra Ace®」,可以高效率地合成cDNA。
●应用范围广
可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各种逆转录情况。
●确证
因含有阳性对照(positive control), 可在确证各步骤的同时推进实验进展。
使用ReverTra Ace -α-®以HeLa Total RNA(1μg)为模板,进行cDNA的合成后,使用各种PCR酶,以β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中,42℃下反应20min.,接着99℃进行5min的失活处理。然后,向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液,使总体系达100μl,进行PCR反应。
结果显示,所有的酶都确认有扩增,ReverTra Ace -α-®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。
1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)
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