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Realtime PCR用cDNA的合成
| ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』开发的Realtime PCR用的逆转录试剂盒，是包含逆转录反应用的所有组分的5×浓度的完全预混型试剂，只需添加模板RNA和水即可迅速地开始反应。另外，由于采用了最适用于Realtime PCR用短链目的片段cDNA合成的反应组分，可在短时间内高效率地制备适用于Realtime PCR的cDNA模板。 |  |
| ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』，反应效率非常出色。另外，通过改良，使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小，即使在PCR反应体系中添加20％体积的逆转录反应液，也能表现出良好的扩增线性。因此，最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作。 |  |
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●可得到更广的可定量扩增区域
将Oligo dT 与Random Primer按最适比例预混，可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录，因此可得到更广的可定量扩增区域。
●与Realtime PCR试剂的配合性良好
采用了对Realtime PCR反应体系影响最小的组分，即使在PCR中添加最多20%的逆转录反应液，也可以得到很高的直线相关性。最适用于表达量少的mRNA的高灵敏度检测。
●完全预混型试剂(仅FSQ-201)
本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水，就可以简便高效率地合成cDNA，且重复性良好。
●容易配制逆转录反应的阴性对照(仅FSQ-201)
因为添附有相同的预混型no-RT对照，能够方便地配制逆转录反应的阴性对照。
1.模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨
| 在ReverTra Ace® qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中，分别添加HeLa细胞来源的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分别进行逆转录反应。然后，采用和实验例2同样的方法进行cDNA合成量的比较。结果可见，在探讨的范围内，模板RNA的量和cDNA的得率密切相关，但无论模板RNA量的多寡，仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见，在目的片段浓度有差异的样品之间，逆转录反应效率的变化并不大，因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。 | |
| 2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较
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| 3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较
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4.与其他公司预混型cDNA合成试剂的逆转录效率（cDNA合成量）的比
| 以HeLa total RNA 100ng为模板，按各公司试剂盒推荐条件进行逆转录，然后进行Realtime PCR对5种目的基因进行定量。结果显示，使用本试剂盒的cDNA得率更高。 | |
| ●cDNA合成 |
1)M. Hatta et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152(2002)
2)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219-2226(2003)
3)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59-66(2002)
4)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246(2002)
5)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453-5460(2001)
6)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666-675(2000)
7)S.Lee et al.,Gene,245:253-266(2000)
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