RT-PCR
使用高效率逆转录酶ReverTra Ace® 及高效率PCR酶KOD Dash®的高效率RT-PCR试剂盒。对这两个酶的最适反应条件进行了优化,可在同一管中进行逆转录反应和PCR反应,可省略将逆转录反应产物分管加样的操作。
ReverTra Ace®是高温反应性能和反应效率都提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-),与原来的RTase相比,可合成更长的cDNA(已确认可合成最长至14kb的cDNA)。另外,PCR反应时用KOD Dash®进行的,可高效且迅速的进行RT-PCR。
●高灵敏度
与原来的RT-PCR试剂盒相比,扩增效率有所提高,即使少量的模板也能高效率扩增。另外,由于可将RT反应液全部用于PCR反应,所以即使表达量少也可以高效率地检测到。
●简便
逆转录反应与PCR两步反应可在同一样品管中进行,操作简便。
●快速分析
KOD Dash在PCR时的延伸时间可以设定为1kb/30sec.,所以能够缩短RT-PCR的时间。
以HeLa Total RNA为模板,以β-actin(838bp)为目的片段进行RT-PCR,改变模板量,比较了本公司原来的产品与其他公司的RT-PCR试剂盒。
将使用MagExtracterTM -RNA-抽提的HeLa Total RNA 100pg〜1.0μg分别加入Oligo(dT)引物中,42℃、20min.进行逆转录反应后,99℃加热5min.进行灭活反应。将RT反应液全部20μl加入到100μl反应体系中进行PCR。
可以确认:ReverTra Dash®与本公司原来的产品及其他公司的RT-PCR试剂盒相比,即使少量的模板RNA也可以进行RT-PCR。
1) S. Natsuka et al., J. Biochem.(Tokyo), 130: 731-735(2001)
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