产品简介
本试剂盒采用SYBR® Green I嵌合荧光法的原理进行lncRNA的荧光定量检测。试剂盒包含lncRNA荧光定量检测的所有试剂,包括2×lnR lncRNA Premix、50×ROX Reference Dye和RNase-Free ddH2O。可对目标lncRNA进行快速、特异性的定量检测。
与mRNA相比,lncRNA具有丰度低、GC含量差异大、二级结构更复杂等特性,传统定量试剂对lncRNA难以达到理想的效果。本试剂盒中的2×lnR lncRNA Premix是专门为lncRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA Polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式,配合特殊优化的Buffer体系,可确保本产品在保证较高的反应特异性的情况下具有更高的检测灵敏度。此外,Buffer中添加了的H-competitor因子和EP组分,使得本产品具有广泛的样本普适性,对不同GC含量的模板、具有复杂高级结构的模板、PCR抑制剂残留较多的模板以及长片段模板等具有非常好的扩增适用性,特别适合高级结构相对复杂,整体丰度相对较低的lncRNA的定量检测。此外,优化的预混液可缩短Real-Time PCR的反应时间,适用于标准或快速定量的PCR反应。
试剂盒特点
1.操作简便。2×lnR lncRNA Premix中预混有SYBR Green I,PCR反应液配制时,只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行快速Real-Time PCR反应,操作简单方便。
2.普适性好。本产品中特别添加了H-Competitor因子,能够竞争氢键、增强双链的打开强度,使本产品具有广泛的样本普适性,对具有复杂高级结构的模板和长片段扩增等具有非常好的适用性。
3.性能卓越。本产品特制的快速PCR Buffer体系含有独特的PCR稳定因子——EP,能够有效的保护酶活,抵御各种PCR抑制剂的干扰,保证了2×lnR lncRNA Premix具有高扩增效率、高扩增特异性、高扩增灵敏度和宽广的可信范围的特点。
4.定量准确。本产品附带ROX Reference Dye,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。
5.稳定性好。2×lnR lncRNA Premix采用无色透明管包装,经检测,光照不会影响体系的定量的结果。
实验例
实验例1. 提取拟南芥总RNA,分别使用TIANGEN KR202+FP402 及国外A 公司提供的解决方案 ( 使用mRNA反转定量试剂) 检测lncRNA COOLAIR,展示扩增曲线、熔解曲线、标准曲线和Ct 值。结果显示,TIANGEN lncRNA 专属检测试剂扩增Ct 靠前,特异性高,梯度优秀,优于竞争公司的mRNA 通用试剂。NTC:阴性对照。ND:未检出。
实验例2. 分别提取人类(左)、小鼠(中)和大鼠(右)总RNA,分别使用TIANGEN KR202+FP402(蓝色线)及国内B 公司提供的解决方案(使用mRNA 反转定量试剂,红色线)检测lncRNA ( 人类:HEIH,小鼠:NONMMUT000882,大鼠:NONRATT000076),展示扩增曲线和熔解曲线。结果显示,TIANGEN lncRNA 专属检测试剂扩增Ct 靠前,特异性高,具有良好的物种普适性,优于竞争公司的mRNA 通用试剂。