概述

本试剂盒适用于克隆带有3’ 末端A突出的PCR产物的克隆。如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等扩增的PCR产物在3’末端后都带有一个突出的碱基A，这样的PCR产物可以用3’末端后带有一个突出碱基T的载体方便地进行克隆。 为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，确保在短时间内可以获得很好的连接效果。独特连接系统允许用户在10分钟的时间里完成连接反应。连接产物可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序。pUCmT含有T7 RNA聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。

特点

• 为了获得快速高效的连接效果，本试剂盒采用了一种特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，确保在短时间内可以获得很好的连接效果。独特连接系统允许用户在10分钟的时间里完成连接反应。连接产物可以用M13通用引物和T7启动子引物对PCR产物进行测序。pUCm-T含有T7 RNA聚合酶的启动子，可以对插入片段进行体外转录。

应用

带A末端PCR产物的快速连接反应的建立

使用说明

1. PCR产物3’末端带有突出的A碱基：Taq、Tth、AmpliTaq、KlenTaq DNA聚合酶扩增的PCR产物3’末端均带有突出的A碱基。建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验，可以使用生工产品柱式DNA胶回收试剂盒（B518131/8132）。如果PCR扩增产物特异性很高，可直接使用生工产品柱式PCR产物纯化试剂盒（B518145/8146）纯化PCR产物。 2. PCR产物3’末端没有突出的A碱基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent 等DNA聚合酶具有3’?5’外切酶活性，其扩增的PCR产物末端可能不带有3’ A，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先对其进行3’末端加A，再进行连接转化实验。建议选用生工产品dA-Tailing Kit （B522291/2292）进行加Ａ实验。 3. 自备试剂：SOC培养基、IPTG、X-gal等。