RNeasy Plus Universal Kits可快速、方便的纯化RNA,同时有效地去除基因组DNA。优化的实验方案可从各种组织类型,包括难裂解组织中纯化高品质RNA。该试剂盒含有QIAzol Lysis Reagent和RNeasy离心柱,前者用于裂解脂肪组织和其他组织类型,后者用于纯化高品质RNA。该试剂盒有两种规格:RNeasy Plus Universal Mini Kit可从至多50 mg组织中纯化RNA,RNeasy Plus Universal Midi Kit可从至多250 mg组织中纯化RNA。RNeasy Plus Universal Mini Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动化进行纯化。
RNeasy Plus Universal操作流程可从各种类型的组织中得到高品质RNA,重复性好,适用组织包括脂肪组织和不易裂解的组织(参见下表)。不同物种和不同发育阶段的组织的纯化产量不同,尤其是脂肪组织。
大鼠/小鼠组织(10 mg) | 总RNA产量 (µg) |
---|---|
脂肪组织 | 0.5–2.5 |
脑 | 5–20 |
心脏 | 5–25 |
肠 | 10–60 |
肾 | 5–40 |
肝 | 15–80 |
肺 | 5–15 |
肌肉 | 5–35 |
皮肤 | 2–5 |
脾 | 15–100 |
使用real-time RT-PCR和QIAxcel体系分析纯化得到的RNA,表明这些RNA具有较好的完整性(参见"High-quality RNA")。gDNA Eliminator Solution和RNeasy技术可高效去除大部分基因组DNA污染,无需进行DNase处理(参见"Effective removal of genomic DNA")。
RNeasy Plus Universal操作流程可从各种类型组织中纯化RNA,包括脂肪或不易裂解的组织。RNeasy Plus Universal Kits整合了苯酚/胍裂解技术和硅胶膜总RNA纯化技术。试剂盒中的QIAzol Lysis Reagent是一种由苯酚和硫氰酸胍组成的单相溶液,专为方便的裂解各种组织设计,并能抑制RNases的活性。高效的裂解以及通过有机抽提去除污染物,使RNeasy离心柱可用于处理更大量的组织。gDNA Eliminator溶液能有效去除基因组DNA污染,非常有助于DNA分离到中间相。
RNeasy Plus Universal操作流程易于进行,与苯酚/氯仿处理后回收相比,此方法更快、更有效,能得到更高纯度和产量的RNA(参见"RNeasy Plus Universal Mini and Midi procedures")。RNeasy Plus Universal Mini Kit可从50 mg组织中纯化RNA;RNeasy Plus Universal Midi Kit可从250 mg组织中纯化RNA。
可使用TissueRuptor、TissueLyser LT或TissueLyser II在QIAzol Lysis Reagent中进行样本匀浆。加入gDNA Eliminator Solution和氯仿后,匀浆离心分为水相和有机相。收集含有RNA的上层水相,加入乙醇,使用RNeasy离心柱纯化RNA。总RNA结合到离心柱膜上,苯酚和其他污染物被高效洗去。获得的高品质RNA可用RNase-free水洗脱下来。
该实验方案适用于富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus Universal操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化包含miRNA等小RNAs的总RNA。
RNeasy Plus Universal Kits纯化得到的RNA非常适用于对少量DNA敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。
Features | Specifications |
应用 | PCR, real-time PCR, microarray |
洗脱体积 | Mini: 30µl; Midi:150µl |
自动化处理 | Mini format can be automated on the QIAcube |
规格 | Mini and Midi Format |
整合基因组DNA去除步骤 | Yes |
主要样本类型 | Tissue samples including difficult-to-lyse and demanding tissues |
处理 | Manual (centrifugation), automated (QIAcube) |
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 | RNA |
样本量 | Mini: 5-50 mg; Midi: 50-250 mg |
技术 | QIAzol/Spin column technology |
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